甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用的论文

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1、甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用的论文甘草活性成分抗呼吸道合胞病毒作用【关键词】甘草；呼吸道合胞病毒；抗病毒作用【摘要】目的研究甘草抗病毒活性成分(gx)体外抗呼吸道合胞病毒(rsv)的作用。方法采用中性红实验和观察细胞病变(cpe)法，以利巴韦林为阳性药,测定gx对rsv的抑制作用。结果gx的半数中毒浓度（tc50）为460.00?μg/ml，半数有效抑制浓度(ec50)为23.53?μg/ml，治疗指数(ti)为19.55;gx在rsv感染hela细胞2，4，6，8，10?h后给药,对rsv复制均有明显的抑制作用(p<0.01)；且gx对rs

2、v有中和作用。结论　gx在体外对rsv复制有明显的抑制作用。【关键词】甘草；呼吸道合胞病毒；抗病毒作用　　呼吸道合胞病毒（rsv）是一个世界范围内婴幼儿最常见的呼吸道感染的病原体。目前，对rsv的防治仍无有效的疫苗和药物〔1〕。近年来，国内外有关抗病毒中药的研究日益增多，从中筛选其有效成分已成为当前抗病毒新药开发的一个热点〔2〕。本课题组在2004年报道甘草水提液具有明显的抗rsv的作用；在2005年发现甘草有效部位gc314具有抗rsv的作用基础上〔3〕,进一步分离到抗病毒活性成分（gx），并在细胞水平上检测其抗rsv的作用。.现将结果报告如下。

3、　　1对象与方法　　11材料　　甘草(产地内蒙古，经黑龙江省药品检验中药研究所鉴定)。利巴韦林注射液(天津药业集团新郑股份有限公司,批号：0610152)。人宫颈癌传代细胞(hela),(中国疾病预防控制中心病毒研究所)。呼吸道合胞病毒(rsv-long株)(中国疾病预防控制中心病毒研究所)。rsv在hela细胞中的组织半数感染量(tcid50)为1×10-6.6/0.2?ml。本次实验采用100tcid50/0.2?ml的感染量。硅胶制备板(安徽良臣硅源材料厂)。甲醇、三氯甲烷、无水乙醇等，均为分析纯(天津市博迪化工有限公司)。中性红(上海华舜生物

4、工程有限公司)，用磷酸盐缓冲液稀释。脱色液：由无水乙醇、枸橼酸钠和盐酸组成。　　12方法　　121甘草抗病毒活性成分（gx）的制备　　甘草经水煎煮浸提、醇沉、大孔吸附树脂柱层析得到的gc314,再经由氯仿和甲醇组成的展开剂，在硅胶板上经薄层层析得gx。　　122　药物毒性实验　　用细胞维持液将gx和利巴韦林释为7个浓度组，分别加入到hela细胞已长成单层的96孔培养板上。同时设正常细胞对照组。置35℃、5%co2培养箱培养3?d后，弃去维持液,每孔添加0.2?ml中性红染液,放回培养箱培养2?h。取出后用磷酸盐缓冲液(pbs)洗2次,添加

5、0.2?ml脱色液。室温暗处放置30?min后,酶标仪450?nm波长下测吸光度(a)值〔4〕，测定细胞存活率，求药物半数中毒浓度(tc50)。细胞存活率=药物组平均a值/细胞对照组平均a值×100%。　　123药物抗rsv实验　　参照文献〔5〕。实验分3组进行。(1)药物的抑制作用：在96孔板上，接种100tcid50/0.2?mlrsv液，0.2?ml/孔。吸附2?h后，分别加入不同浓度的gx和利巴韦林。置培养箱中培养。同时设正常细胞对照组和病毒对照组，待病毒对照组细胞病变(cpe)为4时，中性红实验同上,测定病毒抑制率，求药物的半数有效浓度(

6、ec50)和治疗指数(ti)。病毒抑制率=［实验组(药物+病毒)平均a值-病毒对照组平均a值］/［正常细胞对照组平均a值-病毒对照组平均a值］×100%。cpe记录规则：0为细胞无cpe；1为0～25%cpe；2为25%～50%cpe；3为50%～75%cpe；4为75%～100%cpe。ti=tc50/ec50。(2)不同时间给药对rsv抑制作用：向96孔板中，加入100tcid50/0.2?mlrsv液，0.2?ml/孔，分别作用2，4，6，8，10，12?h后吸弃病毒液，再分别加入gx（浓度为120.00?μg/ml）和利巴韦林（浓度为80.00

7、?μg/ml），培养方法同上。待病毒对照组cpe为4时，记录cpe结果。(3)药物的中和作用：200tcid50/0.2?mlrsv液与含不同浓度药物的维持液等体积混合，35℃作用2?h后,加到96孔板中，0.2?ml/孔。吸附2?h，弃上清，加细胞维持液，置培养箱中培养。待病毒对照组cpe为4时，记录cpe结果。　　13统计分析　　采用sas?82软件进行分析。利用reedmuench法测定病毒tcid50，logit回归计算药物tc50和ec50〔6〕。不同时间处理组或不同剂量组与病毒对照组之间的结果比较采用kruskal-l，利巴韦林的tc

8、50为1.01?mg/ml。　　22药物对细胞内rsv抑制作用(表1)表1gx和利巴韦林对r