呼吸道合胞病毒分离鉴定及感染乳鼠模型的研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：20120013宁夏医科大学硕士研究生学位论文呼吸道合胞病毒分离鉴定及感染乳鼠模型的研究IsolationandIdentificationofRespiratorySyncytialVirusandtheEstablishmentofaSucklingMiceModel学位申请人：朱萍指导教师：王希良申请学位门类级别：基础医学院专业名称：病原生物学研究方向：感染免疫所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一五年三月宁夏医科大学研究生部NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDeg

2、reeIsolationandIdentificationofRespiratorySyncytialVirusandtheEstablishmentofitsSucklingMiceModelStudent’sName:ZhupingSupervisor：XiliangWangSubjectCategory:MedicalscienceMajor:PathogenicBiologySpecialty:Anti-infectionImmunitySchool:SchoolofBasicMedicalScienceCompletionDate:March2015宁夏医科大学学位论文独创性声明本人

3、郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、

4、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文摘要呼吸道合胞病毒分离鉴定及感染乳鼠模型的研究摘要呼吸道合胞病毒（respiratorysyncytialvirus，RSV）是严重危害婴幼儿健康的最常见呼吸道感染病原体。我国RSV发病的高峰季节主要是冬春季，首次感染多发生在1岁以内的婴幼儿，尤其是2-6个月的婴幼儿，感染后常引起婴幼儿细支气管炎和支气管肺炎等下呼吸道疾病，多表现为咳嗽、憋喘、高热，甚至呼吸困难、心力衰竭导致死亡，给人类健康和生命

5、安全造成了严重威胁，由此，WHO提出RSV的防治成为全球首要任务之一。到目前为止，还没有安全有效的疫苗批准上市，而其发病机制尚不清楚，缺乏快速灵敏的检测方法，没有模拟人体RSV感染的高致病性病毒株建立理想动物模型是造成这种现状的主要原因。本论文基于RSV研究没有高致病性临床株及理想动物模型的现实问题，开展了呼吸道合胞病毒分离鉴定及其感染乳鼠模型的研究，以期为RSV疫苗与治疗药物的有效性评价及致病机制的研究奠定基础。目的建立实时荧光定量PCR快速检测RSV感染体系，利用Hep-2细胞分离鉴定临床RSV高致病性强毒株并建立动物模型，为药物、疫苗的评价及致病机制的研究奠定基础。方法利用RSVA2的F

6、基因构建RSVA2质粒，建立实时荧光定量PCR快速检测RSVA感染体系，并评价其敏感性、重复性及特异性。收集临床呼吸道感染重症患儿的鼻咽分泌物样本进行实时荧光定量PCR快速检测，进而采用流式CBA测定患儿血清中细胞因子的变化。阳性临床样本通过Hep-2细胞分离培养，空斑纯化，电镜、RT-PCR及WB鉴定，获得RSV临床分离株。测定RSV临床分离株毒力，并感染14日龄C57乳鼠，通过观察体质量及死亡率的变化筛选RSV高致病性强毒株。采用RSV高致病性强毒株感染乳鼠，通过检测乳鼠体质量、死亡率，感染后1，3，5，7天肺组织的病毒载量、湿干比，病宁夏医科大学硕士研究生学位论文摘要理、炎性细胞总量及血

7、清中细胞因子的变化，建立RSV感染乳鼠模型。结果100份临床呼吸道感染重症患儿鼻咽分泌物样本中，实时荧光定量PCR鉴定为RSVA亚型阳性共21例。流式CBA检测阳性血清发现IL-6、G-CSF、GM-CSF、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β均较正常血清有显著性升高，而IFN-γ则显著性降低。21例阳性临床样本经病毒分离培养、空斑纯化、电镜、RT-PCR及WB鉴定后得到16株RSV临床分离株。