大豆花叶病毒HC—Pro基因保守序列克隆及其RNAi载体的构建-论文.pdf

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1、第32卷第6期大豆科学V0J．32No．62013正l2月SOYBEANSCIENCEDec．20l3大豆花叶病毒册一JF)r0基因保守序列克隆及其RNAi载体的构建高乐，宋英培，李凯，章红运，沈颖超，翟锐，智海剑(作物遗传与种质创新国家重点实验室／南京农业大学国家大豆改良中心／农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室，江苏南京210095)摘要：大豆花叶病毒(soybeanmosaicvirus，SMV)病是全球最主要的大豆病害之一，严重危害大豆的产量和品质。RNA干扰(RNAinterference，R

2、NAi)能够在mRNA水平特异性沉默同源靶基因，为抗病毒作物的培育提供了新的途径。本研究对国内外11个不同SMV流行株系的HC一基因进行了核苷酸序列比对，并以SC3株系的cDNA为模板克隆出高度保守的268bp的基因片段，进而利用GATEWAY技术构建了适合农杆菌介导大豆转化的RNAi表达载体pB7GWIWG2(II)一HC—Pr0。并对BP反应和LR反应的纯化产物进行了测序鉴定，测得序列在NCBI上进行比对，匹配度为100％；以35S启动子和终止子设计引物，扩增得到464和478bp两个片段，说明HC

3、—Pr0基因与pB7GWIWG2(II)重组形成反向重复结构，载体构建成功。结果为利用RNA干扰技术改良大豆对大豆花叶病毒的抗性奠定了基础。关键词：大豆花叶病毒；HC—Pr0基因；克隆；RNAi；GATEWAY技术；载体构建中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2013)06-0744-06Cloning0fConservedSequence0fHC-rDGene0fSoybeanM0saicVirusandConstructi0nofItsRNAiVectorGAOLe，

4、SONGYing—pei，LIKai，ZHANGHong-yun，SHENYing—chao，ZHAIRui，ZHIHai-jian(NationalKeyLaboratoryforCropGeneticsandGermplasmEnhancement／NationalCenterforSoybeanImprovement／KeyLaboratoryofBiologyandGenet—icImprovementofSoybean，MinistryofAgculture，P．R．China，Nanjing

5、AgculturalUniversity，N柚jing210095，China)Abstract：Soybeanmosaicvirus(SMV)isoneofthemajorviraIdiseasesinsoybean，whichseverelyafectsthesoybeanpro-ductionandquality．RNAinterference(RNAi)canspecificallysilencethehomologoustargetgenesinmRNAlevel，whichpro—rides

6、anewstrategyforvirus—resistantcropbreeding．Inthisstudy．wemadethenucleotidesequencealignmentofHC．Pr0genesfroml1popularstrainsofSMVintheworldandcloned268bpthemostconservedgenefragmentusingthecDNAofSC3strain．UsingtheGATEWAYtechnology，theRNAivectorpB7GWIWG2(

7、II)一HC—Pr0isuitableforagrobacterium—mediatedtransformationofsoybeanwasconstructed．IdentificationofthesequenceandthedirectionofHC—Proiinthevectorthroughtheprimersof35SpromoterandterminatorshowedthattherecombinationofHC—PrfJandpB7GWIWG2fII)formedtheinverte

8、dre—peat．ItmaylaythefoundationforimprovementofsoybeanresistancetoSMVusingRNAinterferencetechnology．Keywords：Soybeanmosaicvirus；HC—PrDgene；Cloning；RNAi；GATEWAYtechnology；Vectorconstruction大豆花叶病毒(soybeanmosaicvirus，SMV)病是Pow