单克隆抗体与多克隆抗体配对elisa方法比较

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1、万方数据·研究报告·生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN2009年第11期单克隆抗体与多克隆抗体配对ELISA方法比较张小兵1邸禄芹2吴萌1闫静辉1(1河北省生物研究所，石家庄050081；2河北医科大学第三医院，石家庄050051)摘要：以人绒毛膜促性腺激素(HCG)为抗原，制备出对HCG的多克隆抗体和特异性单克隆抗体，并进行抗体纯化和特性分析，利用辣根过氧化物酶(HRP)分别对其进行了标记。采用双抗夹心ELISA试验，探讨了多克隆抗体与单克隆抗体配对的若干事项。结果表明，利用单克隆抗体和酶

2、标多克隆抗体配对，并用含动物血清的稀释液稀释酶标抗体，可实现对检测原的高特异性和高灵敏度检测。关键词：·单克隆抗体多克隆抗体抗体配对ELISA法StudyoftheOptimumPairingofPolyclonalAntibodiesandMonoclonalAntibodieswithSandwichELISAZhangXiaobin91DiLuqin2WuMen91YanJinghuil(1BiologyInstituteo，Hebei，Shijiaahuang050081；2TheThirdHospit

3、alofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050051)Abstract：Usinghumanchorionicgonadotrophin(HCG)astheantigen，polyclonalantibodiesandmonoelonalantibodies(McAbs)specificforHCGweregenerated，characterizedandhighlypurified．Thentheseantibodieswerelabeledwithhorseradis

4、hperoxidase(HRP)．Byadoubleantibodysandwichenzyme-linkedimmunosorhentassay，severalproblemsoftheoptimumpairingofpolyelonal舳一tibodiesandmonoclonalantibodieswerediscussed．Theresultsshowedthatwithmonoclonalantibodyastrappingantibodyandpoly-clonalantibodylabelingw

5、ithenzymeastestingantibodywhichshouldbedilutedwithanimalseraasdiluent，thesandwichELISAhadahighlyspecificityandsensitivitytodetectantigen．Keywords：MonoclonalantibodyPolycloaslantibodyOptimumpairingofantibodiesSandwichELISA当前，抗体不仅仅用于医学和生物学，它的应用范围已扩大到农业、工业、基础研究

6、、环境保护和食品检测等各个方面。特别是近几年来，抗体在动植物疾病的防治方面越来越活跃。尤其今年，在快速大量检测奶粉中三氯氰胺的过程中，抗体类试剂盒更是凸显了其无比的优越性。但对于抗体配对问题探讨的报道很少。笔者以HCG为抗原，制备了多克隆抗体和单克隆抗体，并以其为模式抗体，利用一种抗体标酶另一种抗体包被酶标板的方式，组装了双抗夹心式ELISA试剂盒。并对检测中出现的一些问题，做了初步探讨，以期为对其他种类标志抗原的ELISA检测提供依据和参考。1材料与方法1．1主要试剂和仪器新西兰大白兔(河北实验动物中心)，雌

7、性BALB／c小鼠(河北实验动物中心)，HCG抗原(1450U／mg，系自行提取)，LH、FSH两种标准品均系卫生部上海生物制品研究所产品，HAT、HT、PEG、福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂(Sigma公司)，辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)，小鼠Sp2／O-Agl4骨髓瘤细胞(本研究室保存)，DMEM培养基、细胞培养板(GIBCO公司)，辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)，小鼠单克隆抗体亚型试剂盒收稿日期：2009·07—13作者简介：张小兵(197

8、3一)，男，河北景县人，高级工程师，主要从事生物技术的应用研究；E—mail：9xiaobin99@sins．COlll通讯作者：同静辉(1963-)，男，河北辛集市人，副研究员，主要从事细胞生物学及抗体工程技术的研究；E—mail：Yanjin#ui@126．c锄万方数据126生物技术通报BiotechnologyBulletin2009年第11期(Sigma公司)，辣根过氧化物酶(