单克隆抗体与多克隆抗体配对elisa方法比较

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1、生物技术通报-研究报告·BloTEcHNoLoGYBULLETIN2009年第11蓍单克隆抗体与多克隆抗体配对ELISA方法比较张小兵邸禄芹吴萌闫静辉(河北省生物研究所，石家庄050081；河北医科大学第三医院，石家庄050051)摘要：以人绒毛膜促性腺激素(HCG)为抗原，制备出对HCG的多克隆抗体和特异性单克隆抗体，并进行抗体纯化和特性分析，利用辣根过氧化物酶(HRP)分别对其进行了标记。采用双抗夹心ELISA试验，探讨了多克隆抗体与单克隆抗体配对的若干事项。结果表明，利用单克隆抗体和酶标多克隆抗体配对，并用含动物血清的稀释液稀释酶标抗体，可

2、实现对检测原的高特异性和高灵敏度检测。关键词：单克隆抗体多克隆抗体抗体配对ELISA法StudyoftheOptimumPairingofPolyclonalAntibodiesandMonoclonalAntibodieswithSandwichELISAZhangXiaobingDiLuqinWuMengYanJinghui(。BiologyInstituteofHebei，Shijiazhuang050081；TheThirdHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050051)Abstra

3、ct：Usinghumanehorionicgonadotrophin(HCG)astheantigen，polyclonMantibodiesandmonoelonalantibodies(McAbs)specificforHCGweregenerated，characterizedandhighlypurified．Thentheseantibodieswerelabeledwithhorseradishperoxidase(HRP)．Byadoubleantibodysandwichenzyme-linkedimmunosorhentass

4、ay，severa]problemsoftheoptimumpairingofpolyclonalan—tibodiesandmonoclonalantibodieswerediscussed．Theresultsshowedthatwithmonoclonalantibodyastrappingantibodyandpoly—clonalantibodylabelingwithenzymeastestingantibodywhichshouldbedilutedwithanimalseraasdiluent，thesandwichELISAha

5、dahighlyspecificityandsensitivitytodetectantigen．Keywords：MonoelonalantibodyPolyclonaiantibodyOptimumpairingofantibodiesSandwichELISA当前，抗体不仅仅用于医学和生物学，它的应用1材料与方法范围已扩大到农业、工业、基础研究、环境保护和食1．1主要试剂和仪器品检测等各个方面。特别是近几年来，抗体在动植新西兰大白兔(河北实验动物中心)，雌性BALB／c物疾病的防治方面越来越活跃。尤其今年，在快速小鼠(河北实验动物中心)，H

6、CG抗原(1450U／mg，大量检测奶粉中三氯氰胺的过程中，抗体类试剂盒系自行提取)，LH、FSH两种标准品均系卫生部上海更是凸显了其无比的优越性。但对于抗体配对问题生物制品研究所产品，HAT、HT、PEG、福氏完全佐剂探讨的报道很少。笔者以HCG为抗原，制备了多克和福氏不完全佐剂(Sigma公司)，辣根过氧化物酶隆抗体和单克隆抗体，并以其为模式抗体，利用一种标记羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公抗体标酶另一种抗体包被酶标板的方式，组装了双司)，小鼠Sp2／O-Agl4骨髓瘤细胞(本研究室保抗夹心式ELISA试剂盒。并对检测中出现的一些存)

7、，DMEM培养基、细胞培养板(GIBCO公司)，辣问题，做了初步探讨，以期为对其他种类标志抗原的根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥生ELISA检测提供依据和参考。物技术有限公司)，小鼠单克隆抗体亚型试剂盒收稿日期：2009-07—13作者简介：张小兵(1973-)，男，河北景县人，高级工程师，主要从事生物技术的应用研究；E—mail：9xiaobing9@sina．corn通讯作者：闫静辉(1963一)，男，河北辛集市人，副研究员，主要从事细胞生物学及抗体工程技术的研究；E—mail：Yanjinghui@126．corn126生物技术

8、通报BiotechnologyBulletin2009年第11期(Sigma公司)，辣根过氧化物酶(HRP，250U／mg争酶免疫试验对