单克隆抗体多克隆抗体制备修改

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1、单克隆抗体多克隆抗体制备班级：03生技6学号：032020821姓名：应尧指导师：郑蔚红摘　要单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用。本文全面综述了单克隆抗体研究最新进展。通过构建真核表达载体,采用DNA免疫、细胞免疫、消减免疫和多位点重复免疫等现代分子免疫学方法,快速制备高亲合力的单克隆抗体,改进常规方法制备单抗费时费力且亲合力低的弱点,对后基因时代蛋白质组学等基础研究领域的研究具有巨大的推动作用;同时在生物芯片、临床医学和疾病的诊断与治疗以及空间生命科学等应用领域有着广阔的应用前景。关键

2、词　多克隆抗体,单克隆抗体单克隆抗体指来自一个B淋巴细胞的单克隆杂交瘤细胞株所分泌的、针对同一抗原决定簇的抗体。1975年，英国科学家米尔斯坦和法国科学家柯勒开创了将产生抗体的单个细胞（如B淋巴细胞）和瘤细胞（如骨髓瘤细胞）杂交的技术，形成杂交瘤细胞，成功地获得了化学性质单一、特异性强的单克隆抗体，并因此获得1984年的诺贝尔生理学及医学奖。[1]半抗原载体复合物有多种结合位点,免疫系统将会产生具有不同特异性的多种抗体(称为多克隆抗体).多克隆抗体包含不同种类的抗体,所以在免疫检测使用之前抗体必须标准化。[2]单克隆抗体的化学本质是蛋白质，合成场所

3、是核糖体，它是由基因控制合成的，合成过程包括转录和翻译两个重要步骤。B淋巴细胞中产生抗体的基因转移到了杂交瘤细胞的DNA中，抗体基因在杂交瘤细胞中指挥抗体合成。杂交瘤细胞以有丝分裂的方式大量增殖，所以在杂交瘤细胞的培养过程中，需要定期地用胰蛋白酶处理，然后分装到更多的培养基中。单克隆抗体具有免疫作用，它与血清抗体相比，优越之处在于特异性强、灵敏度高、产量高。1单克隆抗体制备1.1　单克隆抗体技术的基本原理小鼠骨髓瘤细胞能在体内外无限增殖和分泌无抗体活性的免疫球蛋白,而免疫小鼠脾细胞具有产生抗体的能力,但不能无限增殖。采用融合剂(PEG等)将这两种细

4、胞融合成杂交瘤细胞。这种杂交瘤细胞具有亲代细胞的主要特征。既能在人工培养下无限增殖,又能产生特异性抗体。可通过有限稀释法选育由单个细胞增殖而成的克隆。[3]1.2单克隆抗体技术的基本的过程包括给小鼠注射一种抗原，它可以被免疫系统识别，因此诱导小鼠的B淋巴细胞产生相应抗体。然后，在培养基中融合小鼠的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞，产生杂交瘤细胞，经过筛选分离出单个杂交瘤细胞，再使单个杂交瘤细胞扩增，最后分离、纯化抗体。但这种方法产生的是纯粹的小鼠单克隆抗体，它使患者产生免疫排斥反应。为了克服鼠源性抗体的免疫排斥反应，科学家研究各种各样的技术使小鼠的抗体人

5、源化。一种方法是用人的组分取代小鼠单克隆抗体抗原结合区以外的部分。另外一种方案称为抗体的人源化，即利用遗传工程的方法，用人源蛋白尽可能多地、有选择地取代小鼠抗体，包括大部分抗原结合区。经过长达25年的努力后，研究者最终把人类B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成的杂交瘤细胞可以产生完全人源化的抗体。它使单克隆抗体更接近商品化。也有一些公司转向研究转基因动物和植物，即通过物理、化学或生物学方法，将编码人源性蛋白质的基因转入实验动物（如鼠、羊、牛等）的受精卵中，再将受精卵植入动物子宫，最后培育出可以表达目的蛋白或多肽的转基因动物。转基因哺乳动物在它们的乳汁中分泌

6、单克隆抗体，如表达人胰岛素的转基因羊或牛，这些羊或牛的奶中就含有人的胰岛素，这样，一只羊或一头牛就是一个生物发生器，通过喂养饲料（草）就可以生产胰岛素，大大降低了生产成本，具有巨大的商业价值。但这类产品还没有得到FDA认证，此外从乳汁的蛋白中分离单克隆抗体需要经过烦琐的步骤，并且遗传学方法改造以及喂养这些动物还需要花费很多年。传统制备单克隆抗体的方法需要融合细胞———杂交瘤细胞1.将抗原注射到小鼠体内，产生针对该抗原的抗体。2.a.从脾脏中分离各种B淋巴细胞（可以产生抗体的细胞）。2.b.从骨髓瘤（一种骨髓癌）中获得可以无限繁殖的骨髓瘤细胞。3.融

7、合的细胞形成杂交瘤细胞，未融合的细胞则死亡。4.分离杂交瘤细胞，并在培养基中进行分裂增殖。5.挑选可以与初始抗原结合的杂交瘤细胞。6.在实验室或小鼠腹腔中使杂交瘤细胞增殖。7.从培养基或小鼠腹水中纯化抗体。噬菌体———感染细菌的病毒，可以替代杂交瘤细胞1.将编码与抗原结合的各种抗体片段的基因插入细菌细胞，再用噬菌体感染细胞。2.被噬菌体感染的细菌产生新的噬菌体，每个噬菌体的一端携带一个不同的抗体片段。3.从噬菌体混合物中，筛选出携带抗体片段的噬菌体，这些抗体片段仅与目的抗原特异结合。重复上述过程2-3次。4.将筛选出的噬菌体基因放回细菌中，制备大量

8、、特异的抗体片段。5.将抗体片段拼接在抗体骨架上，制备完整抗体。1.3单克隆抗体优点单克隆抗体有很多优点,如:高度的单一性