p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究.pdf

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1、p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究朱振双，陈伟庆，房殿亮，张杨(重庆医科大学附属第二医院消化内科，重庆400010)中图分类号R734文献标志码A文章编号1001—0408(2012)41—3888—03DOI10．6039／j．issn．1001—0408．2012．41．18摘要目的：利用p15一shRNA表达栽体干扰细胞周期相关基因p15，探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法：用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2／J,~．8fi／2．0，以不同浓度(30、60、90nmol·L_1)的干扰质粒p15

2、．shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA．F)转染HepG2／顺铂／2．0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞，筛选最佳干扰浓度；以筛选结果转染H印G2／顺铂／2．0细胞，与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较，检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bc1．2、Bax的蛋白表达。结果：最佳干扰浓度为6Onmol·L一；与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较，p15．shRNAY2转染细胞的存活率明显增加，G。期细胞明显减少，p15、Bax蛋白表达明显降低，Bcl-2蛋白表达明显增加(P均

3、对顺铂的耐药性。关键词细胞周期；p15基因；肝癌；顺铂耐药；shRNA干扰Efectsofp15GeneonCellCycleandDrugResistanceofHumanHepatomaCellLineHepG2ResistanttoCisplatinZHUZhen—shuang，CHENWei—qing，FANGDian—liang，ZHANGYang(Dept．ofDigestiveDiseases，TheSec—ondAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China)ABSTRACTOBJECTIV

4、E：Tointerferingincellcyclerelatedgenep15byp15一shRNAexpressionvector，andtoinvestigatetheefectofp15geneoncellcycleanddrugresistanceofhumanhepatomacelllineHepG2resistanttocisplatin．METH0DS：Drugre-sistanceofHepG2cellwasinducedbydiferentconcentrationsofcisplatinanddynamicdrug．resistancemodelHepG2／cisplat

5、in／2．0wasestablished．HeDG2／cisplatin／2．0celllinewastransfectedwimdiferentconcentrations(30，60，90nnlo卜L)ofinterferenceplasmid(pl5-shRNAY2)andnegativecontro1interferenceplasmid(shRNA-F)，and48hlaterthefluorescencepositivecellsweredeterminedandtheoptimalinterferenceconcentrationwasscreened．HepG2／cisplat

6、in／2．0celllinewastransfectedaccordingtothere-suitsofscreeningandcomparedwithnon．transfectedcellandnegativecontroltransfectedcel1．Thecellviability．cycledistributionandtheproteinexpressionsofp15．Bc1．2andBaxweredetermined．RBSUIS：Theoptimalinterferenceconcentrationswas6Onmo1．L一1．Comparedwithnon．transfec

7、tedcellandnegativecontroltransfectedcel1．theviabilityoftransfectedcelltargetingp15-shRNAY2increasedsignificantlyandthenumberofitdecreasedsignificantlyatG1phase；proteinexpressionofp15andBaxdecreasedand