Runx3基因对HepG2细胞顺铂耐药性的影响.pdf

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1、第34卷第9期第三军医大学学报Vo1．34．No．92012年5月15日JThirdMi1MedUnivMay152012813文章编号：1000-5404(2012)09．0813—04Runx3基因对HepG2细胞顺铂耐药性的影响郭元红，陈伟庆，房殿亮(400010重庆，重庆医科大学附属第二医院消化内科)[摘要]目的探讨Runx3基因对HepG2细胞耐药性的影响及可能机制。方法取在1．6g／ml顺铂(CDDP)下生长良好的HepG2耐药细胞(HepG2／CDDP一1．6)，建立耐药HepG2／CDDP的动态变化模型HepG2／CDDP／2．0，

2、并予以甲基转移酶抑制剂5一氮_2一脱氧胞苷(5一Aza—CdR)处理；将Runx3一shRNA表达载体转染HepG2／CDDP．1．6细胞，RT．PCR检测处理及转染前后细胞Runx3mRNA的表达。MTT法检测细胞的增殖活性，流式细胞仪分析细胞周期，Hoechst33258检测凋亡，Westernblot检测P—gP表达的变化。结果在动态变化模型中随CDDP诱导时间的延长，Runx3mRNA的表达逐渐降低。5-aza—CdR处理后Runx3mRNA的表达增加，细胞生长受到明显抑制，s期细胞逐渐增加，凋亡细胞明显增多，细胞内P-gP的表达减少。转染

3、Runx3一shRNA载体后HepG2／CDDP一1．6细胞对CDDP的耐受性增强，G期细胞增加，P．gP的表达增加。结论Runx3基因的表达可抑制HepG2／CDDP耐药的形成，提高HepG2／CDDP细胞对化疗药物的敏感性。[关键词]Runx3；耐药；肝癌；DNA甲基化；细胞周期；RNA干扰[中图法分类号]R363．25；R735．7；R966[文献标志码]ARunx3improveschemosensitivityofhepatocellularcarcinomacellsHepG2tocisplatinGuoYuanhong，ChenWei

4、qing，FangDianliang(DepartmentofDigestiveDiseases，SecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing，400010，China)[Abstract]ObjectiveTodeterminetheeffectofRunx3indrugresistanceagainsthepatocellularcarcinomacells．MethodsHepG2／cisplatin(CDDP)kineticanti—cancerdrugresis

5、tancemodelwasconstruc—tedusinganti—cancerdruginducingmethodandtreatedwith5一Aza-2'-deoxycytidine(5-Aza—CdR)fordiferentperiodsoftime．Runx3一shRNAexpressionvectorsweretransfectedintodrug-resistantHepG2cells．Reversetranscription-polymerasechainreaction(RT—PCR)wasusedtodetectRunx3mR

6、NAexpressionbeforeandaftertransfection．CellviabilitywasevaluatedbyMTFassay，andapoptosiswasanalyzedusingHoechst33258．Flowcytometry(FCM)wasusedtodetectthecellcycledistribution，andWesternblottingwasusedtomeasuretheexpressionlevelsofP-gPandRunx3．ResultsTheexpressionofRunx3mRNAwasd

7、ecreasedwiththeincreasingdrugresistanceagainstHepG2cells．However．itwasincreasedgraduallyaftertreatedwith5-Aza—CdR，andcellproliferationwasinhibitedobviously．ThecellsatSphaseandapoptoticcellswereincreased．Also，5-Aza-CdRresultedinadecreaseofP—gP．Down—regulationofRunx3indrug—resis

8、tantHepG2cellspromo-tedthecellproliferation，thecellcyclearres