谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞hepg2增殖及凋亡的影响

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1、谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响作者：徐艳岩安郁宽李波清李京敏【摘要】目的探讨谷胱甘肽(GSH)与顺铂(CDDP)联合应用对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法应用酸性磷酸酶法(APA)检测细胞生长抑制率;用倒置显微镜观察经CDDP、GSH处理后的细胞形态学改变;采用流式细胞术研究GSH与CDDP合用对细胞周期的影响;AnnexinVFITC/PI双染检测细胞凋亡率;罗丹明123染色检测线粒体膜电位(Δψm)变化。结果GSH与CDDP联合应用可以明显抑制HepG2细胞增殖，癌细胞出现凋亡形态变化，其作用明显高于GSH组与对照组细胞，且不低于CDD

2、P单独给药组;GSH与CDDP联合应用引起Δψm更明显地下降。结论GSH与CDDP联合用药不降低CDDP对肝癌细胞的作用，其诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用可能是通过线粒体通路实现的。【关键词】谷胱甘肽;顺铂;肝癌细胞;凋亡;细胞周期　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofglutathione(GSH)binedinetheinhibitionrateofcells.InvertedmicroscopeorphologicalchangesofcellsafterCDDPandGSHtreatment.Floetryitochondri

3、almembranepotential(Δψm)eansofRhodamine123.ResultsGSHbinedoreover,oreobviousdeclineofΔψmthanCDDP.ConclusionsGSHbineditochondiapathportantroleininducingapoptosisofHepG2.　　【Keya;Apoptosis;Cellcycle　　顺铂(CDDP)是目前临床上应用较广泛的一种高效抗癌药物，但因其有肝、肾、神经等毒性而使其应用受到限制。有关　　2.4GSH与CDDP单独及联合使用对HepG2细胞凋亡率的影响对照组细胞培养2

4、4、48h后细胞凋亡率分别为(5.56±1.41)%，(9.96±2.16)%;CDDP组与GSH+CDDP组处理细胞24h后细胞凋亡率分别为(11.01±3.66)%，(9.37±6.52)%;作用48h后细胞凋亡率分别为(55.89±4.35)%，(55.98±4.26)%，两加药组与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.01);GSH+CDDP组与CDDP组比较差异无统计意义(P>0.05)。　　2.5GSH与CDDP单独及联合使用对HepG2细胞线粒体膜电位的影响GSH与CDDP联合作用于HepG2细胞24、48h后，联合用药组弱荧光部分细胞百分比增高，线粒

5、体与罗丹明123结合能力下降，与对照组和CDDP组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，见表3。表3各组HepG2细胞线粒体跨膜电位检测　　3讨论　　CDDP是目前临床上常用的广谱抗癌药物，可与癌细胞DNA链上的碱基结合，干扰DNA复制和RNA转录，从而抑制癌细胞分裂，但因其毒副作用大而使其使用受到限制。普通的临床剂量就可造成肾损害，高剂量时也可造成肝毒性〔9〕。　　GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，是人体细胞内的重要代谢物质，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，能够清除体内的超氧离子及其他自由基，保护细胞膜的完整性，维持细胞的正常代谢。研究发现，作为抗肿瘤治疗

6、的辅助用药，GSH对化疗药物所导致肝损害有较好的预防作用及治疗效果〔10〕。　　本实验认为GSH并未明显影响CDDP的细胞毒性。已有资料表明，CDDP造成脏器损伤的主要原因为自由基损伤，GSH最重要的作用就是抗氧化作用。GSH在抗自由基保护脏器的同时，并未影响到铂的代谢和蓄积〔11，12〕。　　Annexin是一种分子量为35～36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(PS)高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin作为荧光探针，利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。PI是一种可以与DNA和RNA特异性接合的核酸染料，它不能透过完整

7、的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染，将二者匹配使用，可以将活细胞、凋亡早期细胞、凋亡中晚期细胞和坏死细胞区分开来。由流式细胞仪检测结果得知，随着作用时间的延长，GSH明显降低了细胞的凋亡率，但给予CDDP+GSH后，GSH并未影响CDDP引起的细胞凋亡。　　细胞凋亡的主要途径之一是线粒体介导的凋亡通路。凋亡的重要事件与线粒体跨膜电位的改变有关。线粒体膜两侧质子及其他离子的不对称分布形成了线粒体Δψm，罗丹明123可被线粒体质子泵摄入,其摄入量