芒果苷与顺铂联用对肝癌细胞HepG2增殖及PTK活性的影响.pdf

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1、·实验研究·芒果苷与顺铂联用对肝癌细胞HepG2增殖及PTK活性的影响杜正彩邓家刚李好文广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号摘要目的：观察芒果苷与顺铂(DDP)联用对肝癌细胞HepG2增殖及PTK活性的影响。方法：不同剂量芒果苷和(或)顺铂处理HepG2细胞24，48，72h后，用MTY法检测药物对细胞生长的抑制率，用ELISA法测定癌细胞中蛋白酪氨酸激酶(PI'K)活性，并计算两药相互作用系数，比较其协同性。结果：不同浓度的芒果苷和顺铂单独用药或联合用药均可抑制人肝癌HepG2~胞株生成及HepG2~胞

2、中PTK的活性，并且具有明显的剂量一时效关系，抑制作用随着药物浓度的提高、作用时间的延长而增强。不同浓度的芒果苷与顺铂联用较单用对HepG2~胞增殖及PTK活性的抑制率均明显增加(P

3、对癌细胞增殖抑制作用强于芒果苷，而芒果苷对PTK活性抑制作用则明显强于顺铂；两药联用对细胞增殖及PTK活性抑制率的相互作用系数均在O．3—0．7之间，协同作用明显。结论：芒果苷与顺铂联用抑制HepG2．~胞增殖具有明显的协同性与互补性，其机制与顺铂抑制癌细胞DNA复制和芒果苷抑制肿瘤细胞CPTK活性有关。关键词芒果苷；顺铂；联合用药；HepG28ftl胞；蛋白酪氨酸激酶中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1003—0719(2013)03—0059—05原发性肝癌(primaryhepaticporati

4、on)；Leica—DMR倒置显微镜carcinoma，PHC)是指发生于肝细1材料与方法(德国Leica公司)；ELX一800型酶标胞或肝内胆管细胞的癌肿，是一种1．1肿瘤细胞株人肝癌细胞仪(美国BIO-Tek)；SimplicityuV常见实体恶性肿瘤，临床上以肝细HepG2，由广西中医药大学微生物超纯水仪(美国MILuPORE)；胞肝癌最多见。在我国，PHC的发与免疫学教研室提供。EL204万分之一克电子天平(梅特病率和病死率均比较高，在居民死1．2药物与试剂芒果苷(纯度勒一托利多仪器上海有限公司)；因统计中，

5、PHC居全国恶性肿瘤第为98．6％，批号20100801)由广西邦AllegraX一22RCentrifuge离心机三位⋯。顺铂(DDP)对原发性肝癌尔植物制品有限公司提供；注射用(美国BECKMANCOUIER公司)。疗效较好，但其毒性大，易产生抗DDP(山东齐鲁制药厂，批号1．4细胞培养[2HepG2细胞常药性，限制了其临床应用。芒果苷1050141DB)；DMEM(美国Gibco公规培养于DMEM中，用接种传代第(Mangiferin)又名知母宁(Chinonin)，司，批号1397535)；胎牛血清(杭州3天

6、的细胞作实验。实验分为4组。A是一种天然黄酮碳苷类化合物，研四季青公司产品，批号101102)；组：单纯加芒果苷，终浓度为5．0，究表明其具有一定的防癌抗癌作M1．I'(噻唑兰，美国Amresco公司，10．0，20．0g，Ⅱd34-浓度；B组：单用。在本研究中，笔者将芒果苷与批号0793)；胰蛋白酶(美国Am—纯加顺铂，终浓度为0．25，0．5，1．0，顺铂联合应用，观察它们对肝癌细resco公司，批号3518B039)。2．0Ill44-浓度；C组：芒果苷+胞HepG2的体外抑制作用及其对1．3仪器ThermoF

7、orma381型顺铂，用A组各浓度芒果苷分别加肝癌细胞中PTK活性的影响。C2培养箱(THERMOElectronCo卜入B组各浓度顺铂；D组：作为对照基金项目：广西自然基金项目(2OlOGxNsFAO13194)；广西科技攻关项目(桂科攻10124008—10)；广西中医药大学自然科学课题(P2009028)；广西中医药大学自然科学课题(ZD2010025)通讯作者广西中医药2013年6月第36卷第3期组，不加药物。×10o％。箱培养一定时间(24h，48h，72h)1,5MTF法测定药物对肝癌HepG2采用两药相

8、互作用系数(coef-后，洗净细胞培养液后，再加入细细胞生长增殖的抑制率[：】收集处ficientofdrugininteraction，CDI)胞裂解缓冲液充分重悬并冰浴裂于对数生长期的人肝癌H印G2细来评价两药相互作用性质。CDI按解，12000g离心1Omin，得到药物胞，配制成lx104,／~-／ml细胞悬液，接下列公式进行计算：CDI