女性阴道乳酸杆菌的鉴定研究

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1、医学信息2010~5,EJ第23卷第5期医学髟像与检验蓦蓦；；女性阴道乳酸杆菌的鉴定研究谢小军曾忠铭宋作林何丽丽。【摘要】目的：鉴定女性生殖遣乳杆菌种类度各种乳杆菌在阴道中的分布差异。方法：标本接种MRS培养基分离培养，使用API50CHL鉴定奈码对乳杆茵进行分类鏊定后；再根据GenBank中乳酸杆茼l6S一23SrRNA基因间沉默区序列设计引物，测序进一步鉴定乳酸杆茵。结果：API50CHL鏊定出4种乳酸茵，分别为嗜酸乳杆茵、卷曲乳杆茵、德氏乳杆菌、乳酸球茵乳亚种；序列同源分析则为卷曲乳杆菌、格氏乳杆茵、德氏乳杆菌。结论：乳酸杆菌同译性

2、相近，需选择合适的方法才能鏊定出稳定可靠的蛄果。【关键词】乳酸杆茵；16S一23SrRNA；阴道IdentificationStudyofLaetobacillifromWomenVaginaxIEXiao—j=n1zENGZhong—ruing2S0NGZno—lin1elat[Abstract]0bjictiveToidentifythestrainofdifferentlaetobacilliandthedistributionofLactohaeillusinthevaginaoffemalegenitaltract．Method

3、sMRSagarwasusedtocultureLaetobaeillusandAPI50CHLwasusedtoidentifyLaetobacillus，andtofurtherjdentifyLactobacilluswithLactobacillus16S一23SrRNAintergenicspacerregionsequencesinGeneBank．Results4species30strainsLactobacillusweredetectedbyAPI50CHL：Lactobacillusacidopgilus，Laeto

4、bacilluserisparus，Lactobacillusdelbrueckii，Lactococeuslactissuhsplaetis．Meanwhile，ofhomologyofpartiall6S一23SrRNAgenesequenceindicatedthatthestrainbelongedtoLactohacilluscrisparusandLactobacillusdelbrueckii．ConclusionsItwasimportanttoselectsuitableapproachsforidentifyingth

5、estrainoflactobacilliinthevaginaoffemalegenitaltract．[Keywords】lactobacillj；16S～23SribosomalRNAidentifyiVagina．【中图分类号]R446【文献标识码】A【文章编号]1006—1959(2010)05—0238—02本研究主要是通过部分l6S～23SrRNA基因闻沉默区序列的同源性分析鉴定人类阴道乳酸杆菌种类，并与利用糖发酵鉴定乳杆菌的结果进行比较，调查人阴道乳酸杆菌主要构成及优势菌种。①以乳酸杆菌基因组DNA为模板，利用引物部分扩增

6、16S～23SrRNA1材料与方法基因片段。②根据Axygen细菌基因组提取试剂盒的实验方法，提取乳1．1实验材料：标本来源选自本地区妇科门诊妇女的阴道后穹窿酸杆菌的DNA。③根据PCR反应试剂盒的实验方法。进行DNA的PCR分泌液标本，年龄2O～3O岁，排除阴道炎10例，所取的标本在半小时内扩增。④将PCR扩增产物进行凝胶电泳。⑤电泳产物的凝胶成像采集，接种MRS培养基。并根据需要将可疑条带进行割胶回收。⑥根据凝胶回收试剂盒的方法，1．2主要试剂和仪器，见表1。对上述的胶条进行DNA回收。⑦测定回收产量，并送测序公司进行测表1试剂和仪器

7、序。采用DNAStar软件中的ClustalW程序将扩增片段的序列与基因库100bpLadderDNAmarkerAxygen公司乳酸杆菌的16S～23SrRNA基因进行同源性分析。厌氧盒，厌氧产气袋法国梅里埃公司Z结果MRs琼脂粉，肉汤粉美国Oxid公司2．1APICH5OL乳酸杆菌细菌反应板鉴定结果：共鉴定出4种30细菌基因组提取试剂盒Axygen公司株乳酸杆菌，嗜酸乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌、乳酸球菌乳亚种。PCR反应试剂盒Promega公司z．228株乳杆菌扩增产物测序后，分别主要为卷曲乳杆菌和格氏凝胶回收试剂盒Axygen公

8、司乳杆菌，另外有2株因各种原因测序失败。8讨论PCR仪美国ApliedBiosystems公司嗜酸群乳酸杆菌作为女性生殖道中的重要微生物，在维持阴道白净电泳槽Tanon公司及抗感染中起着关键作