丙型肝炎病毒功能基因在CHO细胞中的表达研究.pdf

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#!$$%年&&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+(,-./-0!$$%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!丙型肝炎病毒功能基因在!"#细胞中的表达研究$%&’())*+,-,./01.2+304(51,60*+,-78’+0(*,)+3"(&-0*0*)!9*’1)*,!"#!(77:*,(郭佳，鄢然，徐国东，郑从义"TUV536，W:+167，XUT8(OF(7C674Y

2、ER+TH(7COW3"武汉大学生命科学学院，病毒学国家重点实验室，武汉M"$$%!3/+/%4%25+6(*+/(*2(-7#*(,(12，!(,,%1%(-5#-%30#0%$0%&，8)"+$9$#:%*&#/2，8)"+$M"$$%!，!"#$+摘要丙型肝炎病毒（EH’）与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点。近期研究已经证实EH’的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响。为了进一步研究究竟是EH’中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用，构建了分别含有EH’H(0-、R&、R!、;%、+

3、Z!、+Z"、+ZM:、+ZMJ、+ZL:和+ZLJ基因的真核表达质粒，分别转入宿主细胞HEVO[&中，在TM&I的选择压力下筛选获得稳定表达EH’单个蛋白的细胞系（&$株）。GH1和1?OGH1可分别从稳定细胞系中检测到相应的EH’基因的F+:和.1+:，冻存和复苏不会造成EH’基因的丢失。-@<-07O/)(<检测到稳定细胞系中表达R&，R!和+ZLJ蛋白，说明EH’基因在HEVO[&中已经形成稳定表达。薄层层析（?]H）结果显示，含有不同EH’基因的稳定传代细胞系中，UFGO葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶（UTHT）活性均发

4、生了不同程度的变化，其中R!和;%的表达使胞内UTHT的活性提高了约&倍，+Z!和+ZL:则使UTHT的酶活提高了约$^#倍。该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础。关键词丙型肝炎病毒，真核表达，稳定细胞系，UFGO葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶中图分类号_%I#文献标识码:文章编号&$$$O"$#（&!$$%）$#O$KKLO$L;<)0’-601-2-7<)9，<>-37<-062<3(7@/--;6<3<3@H,308@（EH’）C-7-@674<>->(@<2-))D62<(0@A-

5、0-<>-D(28@(D<>3@D3-)4*H-))D62<(0@37<>-43DD-0-7-.326);6<>A69A-0-6;;0(,-4<(/-37<-0D-0-4A>-7EH’37D-2<3(7*?(.6B-@80-A>32>EH’C-7（-@）A6@<>-.6‘(0D62<(048037C<>-37<-062<3(7;0(2-@@，<-7-8B609(<32-Q;0-@@3(7;)6@.34@2(7<63737C43DD-0-7

6、Z"，+ZM:，+ZMJ，+ZL:674+ZLJA-0-<067@D-2<-437<(<>-HEVO[&2-))@0-@;-2<3,-)9*?>-7<-7@<6/)-2-)))37-@-Q;0-@@37C43DD-0-7-@-)-2<3,-;0-@@80-(DTM&I*F+:674.1+:(D<>-EH’C-7-@A-0-/(<>4-<-2<-4/9GH16741?OGH10-@;-2<3,-)937<>-2(00-@;(7437C@<6/)-

7、2-)))37-@，D0--a6<3(7674676/3(@3@A(8)47(<)(@-<>-EH’C-7-@*J-@34-@，<>-R&，R!674+ZLJ;0(<-37@A-0-4-<-2<-4/9-@<-07O/)(32>4-.(7@<06<-4<>6<<>-EH’C-7-@>6,-D(0.-4@<6/)--Q;0-@@3(737<>->(@<2-))@*?>-62<3,3<9(DUFGOC)82(@-2-06.34-C)82(@9)<067@D-06@-（UTHT）37<>-@<6/)-2-)))37-@3720-

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