群禽腺病毒12个血清型毒株He_省略_蛋白全基因序列测定和酶切位点分析_李海英.pdf

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1、中国兽医学报２０１２年１月第３２卷第１期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＪａｎ．２０１２Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．１３３Ⅰ群禽腺病毒１２个血清型毒株Ｈｅｘｏｎ蛋白全基因序列测定和酶切位点分析李海英，尹燕博＊，徐守振，王建琳，王晓红，王守春（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛２６６１０９）摘要：利用３对引物（Ａ、Ｂ、Ｃ）分别进行Ⅰ群禽腺病毒的１２个血清型毒株的Ｈｅｘｏｎ全基因序列ＰＣＲ扩增，并进行序列测定和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析，通过ＤＮＡＳｔａｒ软件和ＭＥＧＡ软件进行序列分析并绘制遗传发育进化树。结果显示，Ｈｅｘｏｎ基因全长为２８００左右个核苷酸，编码约９４０个氨基酸，不同血清型之间的同源性为７５．２％～

2、９９．５％，变异范围是０．０％～２４．３％。推导的氨基酸同源性为２０．７％～９８．８％，差异性为０．０％～２４．２％。１２个血清型之间Ｈｅｘｏｎ全基因序列信息用来评价Ⅰ群禽腺病毒家族的种系发育关系，构建的进化树显示出５个主要的分支。选用限制性内切酶ＨａｅⅡ，利用存在差异的Ｈｅｘｏｎ序列片段Ｄ特异性可以有效区分大部分血清型。结果表明，获得了Ⅰ群禽腺病毒１２个血清型不同毒株的Ｈｅｘｏｎ全基因序列并进行了分子进化分析，同时结合１２个血清型ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析，为进一步分析鉴别Ⅰ群禽腺病毒不同血清型提供依据。关键词：Ⅰ群禽腺病毒；Ｈｅｘｏｎ全基因；序列分析；ＰＣＲ－ＲＦＬＰ中图分类号：Ｓ８５２

3、．６５７文献标志码：Ａ文章编号：１００５－４５４５（２０１２）０１－００３３－０５Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｖｉａｎａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ（ＦＡＶ）ｈｅｘｏｎｇｅｎｅｇｒｏｕｐⅠｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｃｕｔｔｉｎｇｓｉｔｅｆｒｏｍ１２ｓｅｒｏｔｙｐｅｓｔｒａｉｎｓ＊，ＸＵＳｈｏｕ－ｚｈｅｎ，ＷＡＮＧＪｉａｎ－ｌｉｎ，ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＳｈｏｕ－ｃｈｕｎＬＩＨａｉ－ｙｉｎｇ，ＹＩＮＹａｎ－ｂｏ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑ

4、ｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２６６１０９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙ１２ｓｅｒｏｔｙｐｅｓｏｆａｖｉａｎａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ（ＦＡＶ）ｇｒｏｕｐⅠ，ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｖｉａｎａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｈｅｘｏｎｇｅｎｅｇｒｏｕｐⅠｆｒｏｍｓｅｔｙｐｅｓｔｒａｉｎｓａｎｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）ｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔ．Ｔｈｒｅｅ－ｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓ（Ａ，Ｂ，Ｃ），ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃ

5、ｏｒｄｉｎｇｔｏＨｅｘｏｎｇｅｎｅｓｏｆａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ｇｒｏｕｐⅠｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．１２ｓｅｒｏｔｙｐｅｓｏｆａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｇｒｏｕｐⅠｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ－ＲＦＬＰａｓｓａｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｅｘｏｎｇｅｎｅｗａｓａｂｏｕｔ２８００ｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ９４０ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｐｒｏｂａ－ｂｌｙ，ａｎｄｉｎａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｅｒｏｔｙｐｅｓｈｅｘｏｎｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈＦＡＶ，ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄ

6、ｅｓｅ－ｑｕｅｎｃｅｗａｓ７５．２％－９９．５％，ａｎｄｔｈｅｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙｗａｓ０．０％－２４．３％．Ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｙｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓ２０．７％－９８．８％．Ｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｓｅｑｕｅｎｃｅｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅ１２ｓｅｒｏｔｙｐｅｓｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ０．０％－２４．２％ａｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｐｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｔｈｅｆｏｗｌａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｆａｍｉｌｙ，ｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｗａｓｆｉ

7、ｖｅｍａｊｏｒｃｌａｄｅｓ．ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅＨａｅⅡｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｍａｉｎｌｙｓｅｒｏｔｙｐｅｓｆｏｒＤｆｒａｇｍｅｎｔ．Ｈｅｘｏｎｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ，ｃｏｍｂｉｎｇｗｉｔｈＰＣＲ－ＲＦＬＰｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄａｓｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙ１２ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｖｉａｎａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｇｒｏｕ