豆干中细菌总数及大肠菌群检测.doc

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1、豆干中细菌总数及大肠菌群检测食品学院08食安（3）班潘金富200830610322韦岸200830610323摘要：检测食品中的细菌总数和大肠菌群能从一定程度上反应食品的质量。本实验使用平板菌落计数法和细菌总数PetrifilmTM测试片计数法这两种方法测定豆干中的细菌总数，使用大肠菌群MPN检验方法和大肠菌群PetrifilmTM测试片计数法分别测定豆干中的大肠菌群。通过不同方法测相同样品中细菌总数的结果相差较大，而通过两种方法测得的大肠菌群结果比较接近。关键词：细菌总数大肠菌群平板计数Petrifil

2、mTM测试片前言微生物学检验国家标准对菌落总数定义为：食品检样经过匀质处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和培养时间、pH、需氧性质等），所得1ml(g)验样中所含菌落的总数[2]。。菌落总数一般反映出食品的新鲜程度、是否变质和食品生产的一般卫生状况，是判断食品卫生质量，进行食品卫生学评价的重要指标[3]。菌落总数的检测方法主要有国家标准、IDF国际标准和菌落总数测试片法。国际标准优于国家标准，检出率高，营养全面，计数公式科学，茵落易于分辨，但检验周期较长[4]。而测定方法应该在较短时间内使尽

3、可能多的细胞在培养基上生长，因此国标法更适合于实验教学的展开。测试片法与国标法比较相符程度很高[5]，操作简单，容易判读，但成本较高。大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。多年来国内外都以大肠菌群作为食品污染的常用指示菌，并评价和判断食品被粪便污染的程度和有无肠道致病菌污染的可能[1]。多年来，国内外都以大肠菌群作为食品、水体污染的常用指示菌之一，并评价和判断食品被粪便污染的程度和有无肠道致病菌污染的可能[3]。传统的大肠菌群计数采用多管发酵法，基于泊松分布间接计数

4、最可能数，准确性高。有研究者在初发酵管中加入一定浓度的革兰氏阳性菌抑菌剂和显色剂，直接依据产酸产气及溶液颜色的变化，推算出水样中大肠菌群的含量，也能获得较好的准确性[6]。通过改变培养基成分和特殊加工研制快速检测试剂盒的工作也取得了一定的进展[3]。1材料与方法1.1细菌总数检测培养基与试剂，检测程序，操作步骤，参见国标GB/T4789.2-2008。1.2大肠菌群检测培养基与试剂，检测程序，操作步骤，参见国标GB/T4789.3-2008。2实验结果与分析2.1细菌总数检测结果2.1.1各浓度梯度计数结

5、果表一：稀释度10-610-710-8空白对照平板一菌落数7782320平板二菌落数9891450由表一所示数据可知，随着稀释度的增加，平板一的菌落数呈不规则变化，而平板二的菌落数随稀释度变大而变小。按常理推断，稀释度越大，菌落数应该越小。平板一的不规则变化应该是由操作或是计数的误差导致。2.1.2细菌总数的计算与结果N＝∑C/[(n1+0.1n2+0.01n3)d]式中：N—样品中菌落数∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和n1—第一个适宜稀释度平板上的平板数n2—第二个适宜稀释度平板上的平板数

6、n3—第三个适宜稀释度平板上的平板数d—稀释因子（第一稀释度）N＝∑C/[(n1+0.1n2+0.01n3)d]=（77+98+82+91+32+45）/[(2+0.1×2+0.01×2)×10-6]=425/(2.22×10-6)=1.9×108CFU/mL由计算结果所示，该检样中细菌菌落总数为1.9×108CFU/mL。根据PetrifilmTM测试片法，检样中细菌数为2.4×106CFU/mL。2.2大肠菌群检测结果2.1.1初发酵各浓度梯度阳性管数统计表二：稀释度10-310-410-5空白阳性管

7、数3330由表二数据可知，三个梯度的阳性管数相同，而空白管的阳性管数为零。2.1.2复发酵各浓度梯度阳性管数统计表三：稀释度10-310-410-5阳性管数332由表三所示数据可知，经过发发酵后各梯度的阳性管数有所变化。根据此结果可查出相对应的MPN值。2.1.3大肠菌群MPN的计算与报告经查检索表所得，该检样中大肠菌群MPN值为1.1×105/mL，有95%的可信限。未能得到更准确的结果，需要进一步稀释实验。根据PetrifilmTM测试片法，检样中大肠菌群为1.2×106/mL3实验结论与讨论本实验按

8、照国标法进行操作，尽管产生一定的误差，但能够粗略判断出检样的卫生质量，达到了学习检测菌落数和大肠菌群MPN计数的目的。在细菌总数的测定中，通过平板菌落计数法检测出的细菌菌落总数为1.9×108CFU/mL，通过PetrifilmTM测试片法检测出样中细菌数为2.4×106CFU/mL，两种方法测出的数据相差较大，而且两个空白平板的菌落数为零，无菌水和实验室环境已为无菌环境，说明在实验过程中存在着一定误差，例如没有严格的进行无菌