DB22∕T 396.7-2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第7部分：啮齿动物微核试验.pdf

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1、ICS11.020C05备案号：58326-2018DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.7—2017代替DB22/T396-2014保健用品毒理学评价程序与检验方法第7部分：啮齿动物微核试验本标准仅供内部使用不得翻印ToxicologicalevaluationproceduresandtestmethodsforhealthcareproductsPart7:Micronucleustestinrodents2017-11-10发布2017-12-30实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T39

2、6.7—2017本标准仅供内部使用不得翻印前言DB22/T396《保健用品毒理学评价程序与检验方法》拟分为如下部分：——第1部分：评价程序；——第2部分：急性经皮毒性试验；——第3部分：长期经皮毒性试验；——第4部分：皮肤刺激性试验；——第5部分：皮肤变态反应试验；——第6部分：细菌回复突变试验；——第7部分：啮齿动物微核试验；——第8部分：小鼠精子畸形试验；——第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验；——第10部分：致畸试验；——第11部分：致癌试验；——第12部分：人体皮肤斑贴试验。本部分为DB22/T396本标准仅供内部使用不得翻印-2017的第7部分。本部分按照GB/T

3、1.1—2009给出的规则起草。本部分代替DB22/T396-2014《保健用品毒理学评价程序与检验方法》，与DB22/T396-2014相比,结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术变化如下：——增加了警示；——增加了范围；——增加了仪器与试剂；——修改了标本制作方法；——修改了数据处理和评价结果。本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。本部分起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本部分主要起草人：张晶莹、孙兰、孟令仪、宋昕恬、吴晓刚、隋自洁、高峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——DB22/T396-2004；——DB22/T396-2014。I本标准仅供内部使用

4、不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.7—2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第本标准仅供内部使用不得翻印7部分：啮齿动物微核试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能得安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施。并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了保健用品啮齿动物微核试验评价程序。本标准适用于保健用品啮齿动物微核试验检验方法。2啮齿动物微核试验2.1实验动物常选用小鼠，建议首选NIH小鼠，也可用BALB/C或昆明种等其他小鼠。一般每组10只～12只，雌雄各半；或至少每组6只性成熟雄性小鼠。试验前在实验

5、动物房至少适应3d～5d2.2仪器和试剂本标准仅供内部使用不得翻印2.2.1仪器2.2.1.1生物显微镜；2.2.1.2解剖器械；2.2.1.3注射器；2.2.1.4载玻片、盖玻片；2.2.1.5纱布、滤纸等；2.2.2试剂2.2.2.1小牛血清（灭活）将滤菌的小牛血清置于56℃恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。2.2.2.2姬姆萨（Giemsa）染液成分：Giemsa染料3.8g甲醇375mL甘油125mL配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375mL和甘油，混合均匀，放置37℃恒温箱中保温48h。保温期间，振摇数次，促使染料的充

6、分溶解，取出过滤，两周后用。2.2.2.31/15mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）磷酸二氢钾（KH2PO4）4.50g1DB22/T396.7—2017磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）11.81g加蒸馏水至1000mL2.2.2.4Giemsa应用液本标准仅供内部使用不得翻印取一份Giemsa染液与6份1/15mol/L磷酸盐缓冲液混合而成。现用现配。2.3受试物给予途径和方法给受试物途径尽可能同实际应用一致。一般为单次给受试物，必要时也可多次给受试物。2.4剂量和分组至少设三个剂量组，并设阴性和阳性对照组。高剂量组以1/2LD50为准。如无法测得LD50可以不引起动

7、物死亡的最大浓度下的最大容积，作为最高剂量。中、低剂量组可按高剂量组半量递减。阴性对照组可用溶媒或生理盐水。阳性对照组可用已知阳性药物如环磷酰胺。2.5标本制作方法2.5.1取材动物颈椎脱臼处死后，打开胸腔，沿着胸骨柄与肋骨交界处剪断，剥掉附着其上的肌肉，擦净血污，横向剪开胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血钳挤出骨髓液。2.5.2涂片本标准仅供内部使用不得翻印将骨髓液滴在载玻片一端的小牛血清液滴里，仔细混匀。一般来讲，两节胸骨髓液涂一张片子为宜。然后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm～