DB22∕T 396.8-2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第8部分：小鼠精子畸形试验.pdf

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1、ICS11.020C05备案号：58327-2018DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.8—2017代替DB22/T396-2014保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：小鼠精子畸形试验本标准仅供内部使用不得翻印ToxicologicalevaluationproceduresandtestmethodsforhealthcareproductsPart8:Spermabnormalitytestinmice2017-11-10发布2017-12-30实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内

2、部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.8—2017本标准仅供内部使用不得翻印前言DB22/T396《保健用品毒理学评价程序与检验方法》拟分为如下部分：——第1部分：评价程序；——第2部分：急性经皮毒性试验；——第3部分：长期经皮毒性试验；——第4部分：皮肤刺激性试验；——第5部分：皮肤变态反应试验；——第6部分：细菌回复突变试验；——第7部分：啮齿动物微核试验；——第8部分：小鼠精子畸形试验；——第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验；——第10部分：致畸试验；——第11部分：致癌试验；——第12部分：

3、人体皮肤斑贴试验。本部分为DB22/T396本标准仅供内部使用不得翻印-2017的第8部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分代替DB22/T396-2014《保健用品毒理学评价程序与检验方法》，与DB22/T396-2014相比，结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术变化如下：——增加了警示；——增加了范围；——修改了实验动物；——增加了仪器和试剂；——修改了染毒方式；本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。本部分起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本部分主要起草人：张晶莹、孙兰、孟令仪、宋昕恬

4、、吴晓刚、隋自洁、高峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——DB22/T396-2004；——DB22/T396-2014。I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T396.8—2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：本标准仅供内部使用不得翻印小鼠精子畸形试验警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能得安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施。并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了保健用品毒理学精子畸形评价方法。本标准适用于保健用品毒

5、理学精子畸形检验方法。2精子畸形试验2.1实验动物健康成年雄性小鼠，周龄为7周～12周，体重25g～35g，一般每组至少5只。试验前在实验动物房至少适应3天～5天。2.2仪器和试剂本标准仅供内部使用不得翻印2.2.1仪器2.2.1.1解剖器械。2.2.1.2电子天平。2.2.1.3离心机。2.2.1.4冰箱。2.2.2试剂2.2.2.10.1%秋水仙素置于棕色瓶中，冰箱保存。2.2.2.260%冰乙酸取60ml冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100ml。2.2.2.31%柠檬酸三钠取1g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100ml。

6、2.2.2.4固定液甲醇：冰乙酸=3:1，现用现配。2.2.2.5磷酸盐缓冲液(pH7.4)磷酸氢二钠溶液(1/15mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4,分析纯）9.47g溶于1000ml蒸馏水中。1DB22/T396.8—2017磷酸氢二钾溶液(1/15mol/L)：磷酸氢二钾溶液（KH2PO4,分析纯）9.07g溶于1000ml蒸馏水中。取磷酸二氢钠(1/15mol/L)：80ml与磷酸氢二钾溶液(1/15mol/L)20ml混合，调pH至7.4。2.2.2.6Giemsa染液本标准仅供内部使用不得翻印称取Giemsa

7、染液3.8g，加入375ml甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125ml甘油。置于37℃恒温箱保温48h振摇数次。过滤两周后用。2.2.2.7Giemsa应用液取一份Giemsa染液与9份磷酸盐缓冲液混合而成，现用现配。2.3剂量选择和动物分组设1/2、1/5、1/10、和1/20LD50剂量组以及阳性对照组和阴性对照组。阳性对照组腹腔注射环磷酰胺，剂量为40mg/kg体重。阴性对照组为溶剂对照。2.4染毒方式经皮给予受试物，连续5d，每天一次。动物处死前3h～5h腹腔注射秋水仙素4mg/kg～6mg/kg体重(注射体积：

8、10ml/kg体重～6mg/kg体重)。秋水仙素宜现用现配。2.5试验方法试验步骤：本标准仅供内部使用不得翻印a)于染毒后4周用颈椎脱臼的方式处死动物，剖腹，取出附睾；b)将附睾放入盛有2ml生理盐水的小平皿中，用眼科剪刀剪碎；c)以四层擦镜纸过滤，滤液涂片，自然干燥；d)将