食品添加剂乳铁蛋白的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验.doc

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1、资料四乳铁蛋白食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或相关情况说明内蒙古伊利实业集团股份有限公司21一、乳铁蛋白质量规格要求（一）感官指标项目标准检测方法色泽淡粉红色粉末。取5克被测样品置于一洁净的白色搪瓷皿中，在自然光线下用肉眼观察其色泽和外观形态及其滋气味。滋气味具本产品特有的味道，无异味组织状态均匀、细密粉末，无吸潮、无结块。正常视力下无可见杂质。（二）理化指标项目标准检测方法总蛋白质％≥95.0GB5009.5-2010乳铁蛋白占总蛋白的比例≥90%见本节“二、检验方法”水分％≤8.00GB5009.3-2010灰分％≤5.00GB500

2、9.4-2010铁饱和度5-20%见本节“二、检验方法”pH4.5-6.8检测2%水溶液在20℃下的pH颗粒度要求40目筛分通过率≥85%标准筛检测50目筛分通过率≥50%溶解度完全溶解，无肉眼溶物取0.2克乳粉，置于50℃、200mL水中，充分搅拌2分钟以上，静止后观察。（三）微生物、污染物及真菌毒素指标项目标准检测方法菌落总数（cfu/g）≤1000GB4789.2-2010大肠菌群（cfu/g）≤10GB4789.3-2010平板计数法金黄色葡萄球菌（cfu/g）≤10GB4789.10-2010平板计数法酵母和霉菌（cfu/g）≤50GB4789.15-2010阪崎肠杆菌（

3、cfu/g）0/100gGB4789.40-2010沙门氏菌（cfu/g）0/25gGB4789.4-2010铅（mg/kg）≤0.15GB5009.12-2010砷（mg/kg）≤0.2GB/T5009.11-2003黄曲霉毒素M1（µg/kg）≤0.5GB5009.24-2010二、检验方法（一）用反相高效液相层析法测定乳铁蛋白的纯度211.样品准备对粉状乳铁蛋白，称出20mg乳铁蛋白样品，用MilliQ水配成20mL，1mg/mL的乳铁蛋白溶液，再通过0.2μm的乙酸纤维素膜进行过滤。2.材料和试剂（1）MilliQ水（超纯水18megohmresistivity）（2）95

4、%的乙腈(氰化甲烷)（HPLC级）（3）1%的三氟乙酸（TFA）2.1缓冲液准备（1）缓冲液A：100%MilliQ水把1LMilliQ水装在1L的SCHOTT瓶中。（2）缓冲液B：95%的乙腈分别量取50mLMilliQ水和950ml乙腈。把二者混合，通过0.45μm的滤膜进行过滤。储存在1L的SCHOTT瓶中。（3）缓冲液C：1%的三氟乙酸用移液管量取25mL三氟乙酸放入200mLMilliQ水中，用MilliQ水补至250mL。转移到250mL的SCHOTT瓶中储存。3.仪器设备（1）水基线体系控制和获得数据的设备（Empower）（2）水2695分离组件和2487双λ吸收检

5、测器（3）反相高效液相层析柱---AlltechprosphereC4300A150mm×4.6mm,withAlltechAll-guardGuard7.5×4.6mm.4.高效液相层析的测量方法4.1注射体积50μL已过滤的乳铁蛋白样品或空白液注入柱中供分析。4.2梯度表21时间（min）流速（mL/min）成分曲线%A%B%C0.001.073.316.71010.001.0355510611.001.0187210613.001.0187210615.001.073.316.71064.3温度柱子温度=35°C样品温度=10°C4.4检测在波长280nm处检测乳铁蛋白，乳铁

6、蛋白的洗脱时间大约9.7分钟。5.过程与计算5.1用Empower软件，用样品的层析谱减去空白溶液。5.2结合整个样品的层析谱，算出全部蛋白的含量。然后结合乳铁蛋白的高峰区算出乳铁蛋白的百含量（以蛋白质为基数）。5.3用下面的计算公式计算乳铁蛋白的百分含量（干重）：乳铁蛋白的百分含量(干重)=[蛋白含量/(100-水分)]×乳铁蛋白的百分含量其中：蛋白含量是用凯氏定氮法测定的蛋白含量乳铁蛋白的百分含量是用高效液相层析法测定的乳铁蛋白含量（二）乳铁蛋白铁饱和度的测定1.原理通过向乳铁蛋白水溶液中逐渐加入等分量的三价铁离子溶液直至乳铁蛋白铁饱和。该过程中乳铁蛋白铁饱和度的变化在465n

7、m分光光度计下进行检测，当吸光值不再变化的时候说明乳铁蛋白已经完全饱和。2.试剂2.1FeCl3.6H2O2.2NTA(氨三乙酸)212.3NaH2PO4.H2O2.4Na2HPO4.12H2O2.5NaHCO32.6NaOH2.7NaCl3.溶液的配置3.1配置含有10mM氯化铁和0.1MHCl的溶液：（1）在100mL容量瓶中分别加入：-0.83mL37%的HCl-0.270g的FeCl3.6H2O(准确称量)（2）加蒸馏水至100mL刻度处3.2配置40mMNa