超高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的双氰胺.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAX~)研究报告第11期2013年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistryl729～1733DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30400超高效液相色谱-质谱法测定乳粉中的双氰胺冯峰蒋萍萍李娜思周洪斌储晓刚(中国检验检疫科学研究院，食品安全研究所，北京100123)(华东理工大学药学院，上海200237)。(镇江出入境检验检疫局综合技术中心，镇江212008)摘要双氰胺作为乳粉中一种新出现的污染物，对人体特别是

2、婴幼儿的健康有重要影响。本研究建立了快速、准确测定乳粉中双氰胺的超高效液相色谱一电喷雾电离质谱(UPLC-ESVMS)分析方法。结果表明，采用含2％氨水的乙腈对乳粉样品进行萃取，同时选用UPLCBEHHILIC(150Inm×2．1mm，1．7Ixm)色谱柱为固定相，以10mmol／L甲酸铵／甲酸缓冲液(pH4．0)一乙腈为流动相，梯度洗脱，基质匹配标准曲线定量分析，可以对5～200g／L双氰胺样品进行快速准确测定。在ESI正离子模式下，采用选择离子监测方法进行测定时，乳粉中双氰胺的检出限为10

3、g／kg。加标浓度在50，100和200g／kg样品的回收率分别为83．7％，89．1％和96．7％，相对标准偏差均小于2％。本方法快捷、准确、灵敏度高，可用于乳粉中双氰胺的快速准确测定。关键词超高效液相色谱；串联质谱；双氰胺；乳粉；基质效应1引言双氰胺(Dicyandiamide，DICY或DCD)，是氰胺的二聚体，化学式CHN，结构式见图1。近期，新西兰官方通报其国内的部分牛奶中检出双氰胺，原因是农民将双氰胺喷洒在牧草上，用于阻止肥料副产品硝酸盐流入河流湖泊，结果奶牛却因食用了此类牧草而造成

4、乳汁中含有微量双氰胺_lJ。考虑到高剂量的双氰胺对人体，特别是婴幼儿，具有较强的毒性效应4~6l，我国的食品添加剂国家标准禁止在乳粉中添加此种物质j。因此，及时开展乳制品中双氰胺分析检测方法研究，对于准确了解市场上乳粉中双氰胺的含量水平，科学制定乳粉中双氰胺的限量水平，都具有重要意义。对于双氰胺的检测方法仅有少量报道，主要方法有高效液相色谱一紫外分光光度法_8、液相色谱．质谱法¨’等。由于乳粉中的双氰胺含量通常较低，传统的高效液相色谱法无法对其进行检测。通过对已经报道双氰胺质谱检测法进行实验室验

5、证，发现其普遍存在着样品回收率低、测定结果精密度差等不足。鉴于此，本研究对乳粉中双氰胺检测的样品处理方法和仪器分析方法进行了系统优化，建立了一种可以对乳粉中双氰胺进行快速、准确、高灵敏检测的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱分析方法，本方法已成功用于市售乳粉中双氰胺的检测。2实验部分2．1仪器与试剂超高效液相色谱仪(美国Waters公司)串联API5500三重四极杆质谱仪(AppliedBiosystems，美国)，配备WatersUPLC自动进样器，柱温箱。数据采集由Analyst1．5．1软件

6、(AppliedBiosystems，美国)完成。双氰胺(Dicyandiamide，纯度>99％，北京百灵威科技公司)；甲酸、甲酸铵(美国Sigma公司)；正己烷、乙腈(美国Fisher公司)；氨水(北京化学试剂公司)；实验室用水由Millipore纯水仪制备。l0份乳粉样品来自用户送检样品。2．2标准溶液的配制准确称取双氰胺标准品，用水溶解并定容，配制成500mg／L的标准储备液；准确移取标准品储备液2013-04-25收稿；2O13_08-22接受本文系科技部科技支撑计划课题(No．201

7、1BAK10B04)和质检总局公益性行业科研专项项目(No．2012104002)资助$E-mail：xgangchu@163．com1730分析化学第41卷2mL，混合于100mL容量瓶中，用水稀释配制成10mg／L的标准工作液。将此标准工作液用净化后的阴性乳粉基质溶液进行梯度稀释，最终制成0．01～0．25mg／L的标准溶液，绘制基质匹配标准曲线。2．3样品溶液制备取乳粉样品1．0g于50mL具塞离心管中，加入3．0mL温水(60℃)涡旋，再加入7．0mL氨化乙腈(含2％(v／v)氨水)后，

8、涡旋1min，超声5min。以10000r／min(一10℃)冷冻离心25rain。吸取上清液3．0mL至另一支15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加入3mL正己烷，涡旋混合1min，以4000r／min(室温)离心5min。去掉上层正己烷后，再加入3mL正己烷，涡旋混合1rain，以4000r／min(室温)离心5min后，弃去上层正己烷，将下层溶液转入玻璃管，在40℃下用氮气吹干，用起始流动相(95％乙腈一10mmol／L甲酸铵())1mL复溶，过0．22m有机相滤膜，待测。2．4液相色谱条