固相萃取-液相色谱-串联质谱法检测小鼠肌肉组织中矮壮素.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第12期2012年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry19241928固相萃取一液相色谱一串联质谱法检测小鼠肌肉组织中矮壮素李春梅金芬徐思远刘佳佳L金茂俊邵华王静杨鸣琦(中国农业科学院农产品质量与食物安全重点实验室，农业质量标准与检测技术研究所，北京100081)(西北农林科技大学动物医学院，杨凌712100)(中粮营养健康研究院，北京100083)摘要建立了快速检测小鼠肌肉组织中矮壮素的固相萃取一液相色谱串联质谱(SPE-LC-MS／MS)方法。小鼠肌肉样品经乙腈提取，弱阳离子交换(W

2、CX)固相萃取柱净化，3mL甲酸甲醇(1：99，／V)重力洗脱。采用亲水作用色谱柱(HILIC)，含10mmol／L乙酸钱、0．1％甲酸水溶液一乙腈(40：60，V／V)为流动相，以电喷雾正离子(ESI)、多反应监测模式(MRM)进行矮壮素的定性分析，采用基质标准曲线外标法进行定量分析。结果表明：矮壮素的线性范围为5．0-500．0g／L，线性相关系数为0．9991。在10．0，100．0和200．0~tg／kg添加浓度下的回收率为73．2％～82I3％；相对标准偏差小于9．3％；方法定量限为10．0p．g／kg，能够满足小鼠肌肉组织中痕量矮壮素检测的要求。关键词液相色谱一串

3、联质谱；矮壮素；肌肉；弱阳离子交换固相萃取1引言矮壮素(Chlormequatchloride，CQ)是一种高效、广谱的植物生长调节剂，经叶片、幼枝、芽、根系吸收，进入植株体内，抑制赤霉素的合成，从而有效控制植物生长，提高农产品产量和品质，已被广泛用于小麦、玉米等谷类作物的种植过程】。然而，研究表明，矮壮素可引起中毒]，并对动物的繁殖能力有不良影响“]。美国国家职业安全和健康研究所(NIOsH)发布的化学物质毒性数据库(RTEcs)已将矮壮素列为疑似内分泌干扰物质【1。因此，矮壮素残留问题备受关注。近年来，矮壮素在食品中的残留时有报道。Esparza等在面包、婴儿食品、梨、苹

4、果汁和啤酒中均检出不同浓度的矮壮素，其中在全麦面包中残留量最高，达到126~tg／kg；张曦在北京市场随机抽取的50个批次樱桃番茄样品中，检出矮壮素残留量为0．01～9．44mg／kg，超标率达到46％。矮壮素残留已成为影响食品安全的潜在重要因素。目前，还没有关于动物组织中矮壮素检测方法的相关报道。现有文献方法多针对蔬菜、水果样品，且均无净化步骤，因此，不适用于基质更为复杂的动物组织样品的测定。本研究以小鼠肌肉组织为研究对象，采用弱阳离子交换(wcx)固相萃取柱净化，研究了提取溶剂、洗脱溶剂等因素对矮壮素回收率的影响，建立了固相萃取一液相色谱一串联质谱(SPE—LC—MS／M

5、S)测定小鼠肌肉中矮壮素的检测方法。本方法操作简便，平均回收率为73．2％～82．3％；方法定量限为10．0~tg／kg，可满足毒理学实验中小鼠肌肉组织中痕量矮壮素检测的需要。2实验部分2．1仪器与试剂1200型液相色谱仪(美国Agilent公司)；API2000串联四级杆质谱仪配电喷雾离子源(美国AB公司)；Analysis工作软件(美国AB公司)；十万分之一天平(瑞士MettlerToledo公司)；涡旋混匀器(海门市其林贝尔仪器有限公司)；高速冷冻离心机(美国Thermo公司)；N—Evaptm111型氮吹仪(美国OA公司)；超纯水仪(美国Millipore公司)；KQ

6、一500DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；XBridgeTMHILIC色谱柱(150mmX2．1inin，3．5um，美国Waters公司)；Oasis@WCX固相萃取柱(60mg／3mL，2012—04—09收稿；2012-07—17接受本文系国家自然基金资助项目(No．21107138)E—mail：jinfenbj@163．com；xbndymq@163．tom第12期李春梅等：固相萃取一液相色谱一串联质谱法检测小鼠肌肉组织中矮壮素美国Waters公司)。矮壮素(纯度99．O％，德国Dr．Ehrenstorfer公司)；乙腈、正己烷、甲醇(HPLC级，美

7、国Fisher公司)；甲酸、乙酸铵(HPLC级，美国DIMA公司)；三氯乙酸、无水硫酸钠(分析纯，上海试剂厂)。2．2实验方法2．2．1样品的前处理ICR雄性小鼠脱颈椎处死，迅速分离并剪取肌肉组织，于一80℃下保存备用。称取0．5g(精确至0．01g)小鼠肌肉样品，加入4．0g无水NaSO，研磨均匀后转人50mL塑料离心管中；加入10mL乙腈提取液，超声提取10rain后，在4℃以10000r／min高速离心5min；将上清液全部倒入50mL鸡心瓶中，再加入10mL乙腈溶液重复提取；合并乙腈提取液，在3