化学发光免疫分析翻译.doc

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1、化学发光免疫分析姓名：周金倩学号：113138301专业：环境科学学院：环境科学与安全工程学院2009年第4号第28卷，分析化学的趋势化学发光免疫分析赵丽霞，孙俪，褚晓刚化学发光免疫分析（CLIA）有几种潜在的优势，并且已经在临床医学、生物分析和环境分析屮应用。本文涵盖了CILIA在免疫学、CL标记及相关技术和固相材料屮的应用和最新的进展。我们描述了CLIA的白动化、集成及小型化。我们评价了不同类型的CLIA系统并且预测了它未来的发展方向。关键词：生物分析，化学发光免疫分析，化学发光标记，环境分析，免疫学，标记，制药分析，毒理学分析1.

2、导论由于免疫分析（IA）具有高灵敏度、高选择性、快速检测和不用广泛的治愈就能分析困难的矩阵等优点，因而被广泛应用于制药分析、毒物分析、生物分析、临床医学和环境分析屮。1959年，雅洛和博森⑴用1251作为标记元素，继而放射免疫法（RIA）被发明。虽然RIA方法可靠并精确，但是这种方法在放射性同位素方面的应用还不是很好，放射性同位索限制这种方法必须施用专门的标记物。并且必I的半衰期较短23］,这也限制了放射免疫法的普及。酶联免疫分析方法（ELISAs）比RIA更安全、更容易，因而应用比较广泛。ELISA是以比色、荧光和化学发光（CL）检测

3、为基础的检测方法。然而，传统的比色法检测的灵敏度相对较低⑷。IA具有非常高的检测灵敏度〔何，因而被应用于检测方法中，这种方法依靠的是特异性抗体（Abs）的亲和力和检测方法的灵敏度。在检测方法屮，CL检测方法是在生物技术领域应用范围较广的一个多功能的、超灵敏的T具。CL方法替代了放射性的方法,与IA的检测原理相结合用于检测分了（如蛋白质、激素、药物、核酸和环境污染物等）。现在，CL经常以一个CL标记物的形式或以一种酶或纳米粒了（NP）的检测反应的形式用于IA方法屮。近年来，由于CLIA具有高灵敏度、宽的动态范伟I和完整的白动化等优点，己被

4、广泛的应用于临床医学和环境分析屮。随着重组抗体（rAb）技术、标记和相关技术、固相材料、自动化的技术改进、集成化和小型化技术的应用和发展，CLIA已经获得一个全新的改观。2.免疫识别在过去，多克隆和单克隆Abs（pAbs和mAbs）—直主导看IA,并且以后也会继续⑺。传统上，Abs可以从超免疫动物和杂交瘤细胞屮茯得。迄今为止，表1展示了rAbs在很多动物体内提取（如兔了、羊、鸡和牛），这种提取方法相对比较便宜且提取量比较大，但是这种提取方法会掺杂看结构相似的化合物和共存污染物，共存污染物用于分析以pAb为基础的检测基质效应。虽然mAbs

5、通常由小鼠体内提取⑻，但是它们拥有特异性结合的特点，并且是基于单克隆抗体的检测，比基于pAb为基础的检测更为敏感。生产单克隆抗体的主要缺点是它们很昂贵并且产生和维持一个杂交瘤细胞株切要求的技术水平比较高。动物的免疫反应可以预先确定单克隆抗体的结合特性并且在蛋白质水平上很难修改［⑹。然而，由于表达抗体片段的分了方法和生产及筛选组合库技术的发展，目前已经开辟了一个比较宽的用于选择和设计rAbs的机会［叫rAbs不需要结合骨髓瘤细胞就可以从各种动物体内提取。从动物体内提取的抗体基因能够通过聚合酶链反应（PCR）而扩增，并能以各种形式在不同的表

6、达系统屮被表达。［例如：片段，抗原结合（Fab）,片段，变量区域（Fv）,单链Fv（scFv）和单域的重链可变区片段（VHH）,从骆驼体内提取的重链Abs（HCAbs）］如图1。分析物抗体片段参考文献阿特拉津杂交瘤细胞的Fabs[12]毒死蝉■乙基杂交瘤细胞的单链抗体可变区域片段[13]多氯联苯杂交瘤细胞的Fabs[14]细胞表面蛋白质人的重组体单链抗体可变区域片段［⑸二恶英(2,3,7,8-TCDD)杂交瘤细胞的Fab[16]fPSA,fhK2,thK2重组的Fab［⑺克伦特罗B■激动剂杂交瘤细胞的单链抗体可变区域片段[18]伏马菌素

7、B1杂交瘤细胞的单链抗体可变区域片段[19]甲胺磷小鼠的单链抗体可变区域片段[20]软骨藻酸羊的单链抗体可变区域片段R1]fPSA（自由的前列腺特界性抗原）；fhK2（自由的人体激肽释放酶2）；thK2（总的人体激肽释放酶）表1.用于免疫分析的重组抗体这些抗体片段有三个主要的有点：（1）它们的体积比较小，因此更容易操纵基因并在细菌体内表达。（2）它们可以被表达并作为融合蛋白在噬菌体表面被（3）显示时，它们保留亲和选择的功能。重组抗体片段天然抗体vvIgGFabFvVHscFv图i.传统的抗体分子的结构及其不同的重组形式他因此就生产方面来

8、说，rAbs为传统的mAbs或pAbs提供了优势，增加了保留选择性和多功能性的优点。从大噬菌体体内提取生产和选择抗体片段已成为一个常用生产特定的Abs的方法。当Abs被用来抵抗小的，无免疫原性的分了（半抗原