电化学发光免疫分析

《电化学发光免疫分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析三大经典酶免技术酶免疫技术发光免疫技术放射免疫技术电化学发光免疫分析按标记物分类化学发光免疫分析(鲁米诺)化学发光酶免疫分析(辣根过氧化物酶,HRP)微粒子化学发光免疫分析(二氧乙烷,磷酸脂)电化学发光分析(三联吡啶钌)生物发光免疫分析法(荧光素)电化学发光免疫分析按检测形式分类液相:反应经离心或分离措施后测定固相:固定在固相载体中检测均相:在液体中进行,不经离心或分离固相载体电化学发光免疫分析在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相

2、应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。电化学发光免疫分析发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。根据形成激发态分子的能量来源不同可分为:光照发光、

3、生物发光、化学发光等。电化学发光免疫分析在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。三联吡啶钌原理：以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析以TSH为例第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2++N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反

4、应杯中，孵育9分钟。第二步：将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。电化学发光免疫分析下一步，蠕动泵将形成的[Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光剂[Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各

5、失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru

6、(bpy)3]2+的浓度呈线性关系，故可测出待测抗原的含量。电化学发光免疫分析项目广泛:三联吡定钌NHS可与与蛋白质,半抗原激素,核酸等各种化学物结合,因此检测项目很广泛例如检测小分子蛋白抗原时可采用竞争法,检测大分子抗原时可采用夹心法,检测抗体时可采用夹心法等电化学发光免疫分析灵敏度:<1pmol,线性:>10000时间:<20min电化学发光免疫分析稳定性:钌化合物稳定性好,常温下半衰期可达一年以上.被标记的蛋白活性在2~5度可保持一年以上.试剂稳定,35度可放置3周,标准曲线形态基本保持不变电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析应用激素病毒检

7、测肿瘤标志物谢谢！Thankyou!