课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课程标准测定某种微生物的数量。课标解读1.利用选择培养基分离细菌。2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。1．筛选菌株(1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对的要求，到相应的环境中去寻找。(2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。微生物的分离与计数生存环境目的菌株抑制阻止(3)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。2．统计菌落数目(

2、1)常用方法：法。(2)统计依据：当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。(3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在的平板，计数公式为。特定抑制阻止稀释涂布平板稀释度活菌30～300每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M3．设置对照(1)对照实验：是指除了以外，其他条件都相同的实验。(2)主要目的：排除实验组中对实验结果的影响，提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，需以培养基培养作为空白对照。被测试因素非测试

3、因素牛肉膏蛋白胨[思维激活1]上述的对照组培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)是否也需接种？如何确认所制备的选择培养基的确起到了选择作用？提示为确认培养基是否被杂菌污染时，对照组的牛肉膏蛋白胨培养基不需接种。欲确认所制备的选择培养基是否起到了选择作用，应同时对对照组的牛肉膏蛋白胨培养基进行接种——若对照组培养基中菌落种类明显复杂于实验组，则可确认选择培养基的确起到了选择作用。1．选择培养基的制作方法(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑

4、制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳

5、源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。2．结果分析与评价内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养物中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养物中混入其他杂菌选择培养基的筛选作用牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目选

6、择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到三个或三个以上菌落数目在30～300的平板操作成功重复组的结果若选取同一种土样，统计结果应接近特别提示(1)不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面的特征不同，可以作为菌种鉴定的重要依据。(2)进行活菌计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)选择培养基一般只生长具有特定代谢特性的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。【巩固1】苯酚是工业生产排放的有

7、毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基______(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用______法。(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于____________________；使

8、用____________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是________________________________________________________________________________________________。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？___________________________________________________。解析根据微生物对营养的需求，在培养基中加