课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数基础知识1．尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。2．科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是:。不能氨和CO2脲酶热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。（一）筛选菌株筛选菌株的原理：自然界中寻找方法：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应环境中去寻找。实验室筛选方法：人为提供有利于目的菌株

2、生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。知识记录1〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。〖思考2〗该培养基对微生物____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是：根据培养基配方回答：葡萄糖尿素凝固剂具有只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。1、测定微生物数量的常用方法：活菌计数法（稀释涂布平板法）显微镜直接计数法（统计菌落数，

3、30-300）（二）统计菌落数目统计菌落数目的理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。注意：统计的菌落数比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是_____菌落。因此，统计结果一般用来表示。低一个菌落数〖思考3〗2、计算方法：如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？每克样品中的菌株数＝（C÷V）×MC：某一稀释度下

4、平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml)M：稀释倍数〖思考4〗你认为第位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是：二第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。设置对照的主要目的是：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度（三）设置对照〖思考5〗分析：A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有其它氮源。方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。实验设

5、计实验流程：取样配制土壤溶液样品系列稀释涂布平板与培养、观察菌落计数1．土壤微生物主要分布在距地表cm的近中性土壤中，约为细菌。2．分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。3～870％～90％不同微生物在土壤中含量不同菌落数在30～300之间、适于计数3．培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般在℃培养5～7d，霉菌一般在℃的温度下培养3～4d。4．在菌落计数时，每隔h统计一次菌落数目。选取时的记录作为结果，以防止因而导致遗漏菌落的目。30～37

6、25～2825～2824菌落数目稳定培养时间不足5．菌落的特征包括，，等方面。形状、大小、隆起程度、颜色实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要。2）应在旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。4）实验时要对培养皿作好标记。注明、。等。5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。灭菌火焰锥形瓶培养基类型培养时间、稀释度、培养物结果分析与评价课题延伸1．对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。2．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将

7、尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH升高。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。生物化学脲酶pH3．　在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变，说明该细菌能够分解尿素。酚红红知识记录3分解尿素的细菌鉴定：鉴定的原理：鉴定方法：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pH升高。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。〖思考6〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现

8、色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取_____个水样。伊红美蓝黑三1．实验测定链霉素对3种细菌的