课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、1.研究和应用微生物的前提是？2.实验室培养微生物关键是什么？防止杂菌入侵，获得纯净的培养物（1）需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件〖复习回顾〗（2）需要确保无处不在的微生物无法混入。a.培养基种类：b.培养基成分：c.培养基配置：固体培养基、液体培养基碳源、氮源、水、无机盐计算、称量、溶化、（调pH）灭菌、倒平板PH、特殊营养物质、氧气等无菌技术确保培养物不被污染确保实验员不被污染3.分离、纯化大肠杆菌的方法及原理？方法：（1）利用平板划线法或稀释涂布平板法接种培养（2）挑选单一菌落进行扩大培养原理：不同微生物菌落特征不同专题二微生物的培养与应用课题2.土壤中分解尿素的

2、细菌的分离与计数实例分析：尿素是一种有机物，不能被农作物吸收，植物如何才能利用尿素？土壤中的细菌可以将尿素分解为氨这类细菌可以产生脲酶土壤中的细菌为什么可以分解尿素？思考：怎么从土壤中分离出这些细菌呢？CO(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O阅读课本P21，感悟科学家寻找耐高温的DNA聚合酶给你的启示。你如何将土壤中分解尿素的细菌分离出来？1.原理：（一）筛选菌株人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。一、研究思路利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。2.尿素分解菌分离的原理：思考：分离土壤中分解尿素的细菌时，你将如何配置培养基

3、()①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦C能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存此培养基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？化学组成提供的营养KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4﹒7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000mL〖学生活动〗下表为分离分解尿素的细菌的培养基配方，请分析、回答下列问题。无机盐无机盐无机盐碳源氮源、碳源不提供营养，凝固剂水3.选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

4、〖举一反三〗分离下列微生物，你将如何配制培养基无氮源的培养基无碳源的培养基含有青霉素的培养基含有高浓度食盐的培养基（1）将土壤中的固氮菌分离出来（2）将土壤中自养微生物分离出来（3）筛选出抗青霉素的微生物（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物〖延伸思考〗不一定，只要能利用尿素的微生物都可以分离出来。如芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。1.含有尿素的选择培养基只能分离出一种分解尿素的细菌吗？2.如何鉴定分离得到的就是能分解尿素的细菌？在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素

5、。（见：教材P26课题延伸）〖实验探究〗要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。实验组:对照组:培养基中的氮源只加尿素牛肉膏蛋白胨培养基接种接种只生长尿素细菌生长多种微生物阅读课本22页统计菌落数目部分：1.微生物计数都有哪些常用方法？（二）统计菌落数目因为平板划线法无法较准确计数，一般只用于菌种的分离①显微镜直接计数②活菌计数法：：利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察为什么不用平板划线法？在稀释度足够高时，微生物

6、在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。a、原理：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。b、计算：稀释涂布平板法〖活学活用〗某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4√同学平板1平板2平板3平均数评价甲230230乙21212256163结论没有设置重复组，因此结果不具说服力。1个平板

7、的计数结果与另2个相差太远,说明操作过程中可能出现了错误①设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。②在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致（30-300个），结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。2.实例分析：两位同学的结果是否准确？导致不准确的原因可能是什么？由此，你得出的结论是什么？(因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌