课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导入新课上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。土壤微生物尿素是一种重要的农业氮肥，分子式为H2NCONH2，不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。原因:土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2+H2O脲酶CO2+2NH3一、研究思路二、实验设计三、结果分析与评价你能想一想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？想一想（一）筛选菌株一研究思路耐热微生物温泉耐寒微生物冰川分解石油的细菌油田筛选

2、原则：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。实例：TaqDNA聚合酶的发现DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？科学家是从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶的。美国黄石国家公园的一个热泉2、选择培养基定义允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。选择培养基配方葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H200.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml

3、在左图的培养基配方中，碳源和氮源分别是什么？碳源——葡萄糖、尿素氮源——尿素1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点（二）统计菌落的数目2、稀释涂布平板法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。样品稀释培养示意图①选30∼300个菌落的平板统计。②每个稀释度取3个平板取其平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数

4、，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。（三）设置对照：（1）设置对照的目的：（2）对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。实验组：对照组：设置对照----同等条件下，培养空白培养基。菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(

5、或者是混入了其他的含氮物质)小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。