本章小结 (2).doc

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1、资料1CAR-T，全称是ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。这是一个出现了很多年，但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。尤其在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。CAR-T的原理就是通过基因工程手段修饰人的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(chimeric antigenrecetor,CAR)，即将识别肿瘤细胞表面抗原的抗体与激活T细胞所需的信号分子连接，以此增强T细胞对肿瘤的特异性杀伤。资料2第一代CAR介导的T细胞激活是通过CD

2、3z链或FceRIg上的酪氨酸激活基序完成的。CD3z链能够提供T细胞激活、裂解靶细胞、调节IL-2分泌以及体内发挥抗肿瘤活性所需的信号。但第一代CAR改造T细胞的抗肿瘤活性在体内受到了限制，T细胞增殖减少最终导致T细胞的凋亡。第二代CAR在胞内增加了一个新的共刺激信号，实验证明，这使得原有的使源自TCR/CD3复合体的“信号1”扩大，许多研究都表明，搭载了“信号2”的第二代CAR与第一代CAR相比，抗原特异性不变，T细胞增殖、细胞因子分泌增加，抗细胞凋亡蛋白分泌增加，细胞死亡延迟。常用的共刺激分子为CD28,但之后有研究将CD28用CD137（4-1BB）进行替

3、换，除此之外，一种使用NK细胞受体CD244的思路也被提出来。虽然不同的第二代CAR究竟孰优孰劣，不同的研究者用不同的肿瘤在体内和体外的研究中得到的结果不尽相同；但与第一代CAR相比，这种设计能够增加对肿瘤细胞裂解的记忆效应以及CAR介导的杀伤效应。为了进一步改良CAR的设计，许多研究组开始着眼于发展第三代CAR，不仅包括“信号1”、“信号2”，还包括了额外的共刺激信号。不同研究者们用不同的靶点和共刺激信号开展的研究所得到的第二代CAR和第三代CAR的比较结果存在一定的差异性。一些研究报道表达第三代CAR的重组T细胞在抗肿瘤活性、存活周期及细胞因子释放方面均显著提

4、高；Wilkie等的研究结果显示靶向MUC1的第二代CAR与第三代CAR重组T细胞在抗肿瘤细胞毒性方面并无明显差异，虽然表达第三代CAR的T细胞能够分泌更大量的IFN-γ。值得注意的是，上述区别仅仅是体外实验中获得的结论，目前尚未在体内比较第二代和第三代CAR的报道。这两代CAR之间的差异可能不止来自于信号传导域，胞外的抗原结合域（scFv）、重组T细胞的转染方法（慢病毒VS逆转录病毒）、重组T细胞的回输方式（静脉回输VS腹膜VS瘤体）等均可能影响CAR-T细胞的最终抗肿瘤效果。资料3治疗流程一个典型的CAR-T治疗流程，主要分为以下五个步骤。①分离：从癌症病人身

5、上分离免疫T细胞。②修饰：用基因工程技术给T细胞加入一个能识别肿瘤细胞并且同时激活T细胞的嵌合抗体，也即制备CAR-T细胞。③扩增：体外培养，大量扩增CAR-T细胞。一般一个病人需要几十亿，乃至上百亿个CAR-T细胞（体型越大，需要细胞越多）。④回输：把扩增好的CAR-T细胞回输到病人体内。⑤监控：严密监护病人，尤其是控制前几天身体的剧烈反应。整个疗程持续3个星期左右，其中细胞“提取-修饰-扩增”需要约2个星期，花费时间较长。一．典型例题1．（2017朝阳一模29）（16分）B淋巴细胞瘤是一种恶性肿瘤，用4常规手段治疗时，会损伤大量的正常组织细胞，因此探索高效的治

6、疗手段已成为肿瘤治疗领域需要迫切解决的热点问题。（1）B淋巴细胞瘤产生的根本原因是。正常机体通过特异性免疫中的免疫对肿瘤细胞发挥着免疫监控和清除的作用，但由于各种原因，导致肿瘤细胞表面抗原表达量，无法被识别，从而成功躲避攻击而快速增殖。（2）实验证实，CD19是B淋巴细胞瘤中特异性表达的一种抗原，在少数正常细胞，如B细胞、浆细胞中也有少量表达；CD28、CD137可激活Ｔ细胞，使其恢复增殖和抗肿瘤能力。科研人员利用技术获得的CD19单克隆抗体，与CD28、CD137组成嵌合抗原受体（CAR），结构如图。请预测CAR在免疫应答中的优势：。（3）利用酶将控制CD19单

7、抗、CD28、CD137等合成的相关基因构建成嵌合基因，并与作为的病毒结合，导入到T细胞并整合到上，检测到目的（嵌合）基因表达后，培养并获得大量的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）。（4）对CAR-T的抗肿瘤效果进行检测。①选取裸鼠的原因是。②B组注射适量的，D组注射等量。③实验证实CAR-T细胞对小鼠体内的肿瘤生长有明显抑制作用，实验结果应为。（5）你认为将CAR-T用于人类肿瘤治疗，可能存在的风险是。2.（2018东城一模29）(18分)CAR-T细胞是利用基因工程制备的一种T细胞，其表面的嵌合抗原受体(简称CAR)能直接识別肿瘤细胞的特异性靶抗原(如CD19)

8、。研究人员