资源描述：
《微生物实验报告---实验室环境和人体表面的微生物检查》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验室环境和人体表面的微生物检查生命科学学院生科3班郑小煜201100140069同组者：赵莉刘梦迪高瑞2012年9月26H一、实验忖的和要求1、明确配制培养基的制备原理，掌握配制培养基的一•般方法步骤。2、学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。3、证明实验室环境和人体表面存在微生物。4、体会无菌操作的重要性。5、观察不同类群微生物的菌落形态特征。二、实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取门不同来源的样品接种于培养基上，在37°C温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁
2、殖，形成一个町见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、实验器材1、培养基牛肉膏蛋白月东琼脂平板（配方/1000mL：牛肉膏3g,蛋口10g,NaCI5g,财旨15-20g,水1000mL,PH7.0-7.2）,lmol/LNaOH/HCI2、溶液和试剂无菌水3、仪器和其他用品灭菌棉签（装在试管屮），
3、试管架，煤气灯或酒精灯，记号笔和废物缸，试管，三角瓶，平板，PH试纸，牛皮纸，纸绳等。四、实验步骤1、培养基制备（1）计算：按培养基配方比例依次计算出所需要的牛肉膏、蛋白腺、NaCI＞琼脂的质量。（2）称量：按计算值依次准确地称取所需质量的牛肉膏、蛋白腺、NaCI放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，取出纸片。（3）溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀,然后，在石棉网上加热使其溶解。药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已
4、溶的药品中，再加热溶化，最后补充所损失的水分。在制备用三角烧瓶盛固体培养基时，一般也可以先将一定量的液体培养基分装于三角烧瓶屮，然后按2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角烧瓶中，不必加热熔化，而是灭菌和加热熔化同步进行，节省时间。（4）调PH：在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入lmol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH,直至PH达到7.4~7・6仮之，用lmol/LHCI进行调节。（5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角
5、瓶内。①液体分装：分装髙度以试管髙度的圳左右为宜。分装三角瓶的量则根据需耍而定，一般以不超过三角烧瓶容积的V2为宜。②固体分装：分装试管，其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。（6）加塞：将培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染。（7）包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配置FI期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同
6、样用记号笔注明培养基名称、组別、配置日期。（8）灭菌：将上述培养基以O.IMPa,121°C,30min高压蒸汽灭菌。2、平板制备将盛有培养基的三角瓶瓶取出，冷却至45~50°C，点燃酒精灯，右手持三角瓶置火焰旁边，用左手将瓶塞轻轻拔出，瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指（环指）夹住瓶塞。左手持培养皿并将血盖在火焰旁打开一缝，迅速倒入培养基约10mL,加盖后轻轻摇动培养皿,使培养基均匀分布在培养基底部，然后平置于桌面上，待凝后，倒置。3、接种在平板边缘上写上姓名及H期，标明待接种的样品名。
7、（1）空气：将标有空气5min,lOmin的培养1111各3支同时打开1111盖，依次暴露在空气+5min,lOmin后盖上1111盖，倒置。（2）桌面：取出灭菌棉签，用无菌水湿润后，在实验台面擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处深入平板表面，“之”字形滚动一下，立即闭合1111盖，倒置。（3）用同样的方法接种洗手前和洗手后手上的微生物各3组，以及实验服和手机上的微生物。（4）头发：将1—2根头发轻轻放在平板上，迅速盖上皿盖，倒置。4、培养在37°C条件下培养两套，在28°C条件下培养一套，皿底
8、朝上。5、观察（1）观察菌落形态，区分霉菌、细菌。（2）菌落描述（圈记）A、大小大、中、小、针尖…B、颜色一一白、乳白、黄…C、干湿——干燥、湿润D、形态——圆、不规则…E、边缘整齐、锯齿…F、表面——隆起、扁平、凹、凸…（3）不同条件下细菌的比较（种类、数量）（4）相似菌（同一种菌）寻找并描述。（同组/它组）6、画线分离（1）倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基的名称、菌种编号（2）划线：在皿底划线将培养皿分
