利巴韦林注射液的细菌内毒素检查

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1、利巴韦林注射液的细菌内毒素检查一、试剂和样品：蠻试剂（批号：0508031,灵敏度：0.25EU/ml湛江I■専康海洋生物有限公司生产）细菌内毒素工作标准品（内毒素工作标准品2005-6,100EU/支，中国约品生物制品检定所提供）利巴韦林注射液（规格：100mg/ml,批号：050302生产厂家：广东南国药业有限公司）二、灵敏度复核：2-1、标准品的准备取细菌内毒索工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。根据蛍试剂灵敏度的标示值（0・25

2、EU/ml）,将细菌内毒素工作标准品2005-6用细菌内毒素检查用水Ind溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后通过稀释制备成0.50EU/ml.0.25EU/ml>0.125EU/ml和0.06EU/ml四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。得10EU/ml；得LOEU/ml；得0.50EU/ml；得0,25EU/ml；得0.125EU/ml；①、取51细菌内毒素检查用水溶解工作标准晶，得1OOEU/ml；②、取第①步溶液0.2m1+细菌内毒素检查用水1.8ml,③、取第②步溶液0.2ml+细菌内

3、毒素检查用水1.8ml,④、取第③步溶液l.OmR细菌内毒素检查用水1.0ml,⑤、取第④步溶液1.0ml.+细菌内毒索检查用水1.0ml,⑥、取第⑤步溶液1.0ml+细菌内毒素检查用水1.0ml,⑧、取第步溶液ml+细菌内毒素检查用水ml,得EU/ml；⑨、取第步溶液011+细菌内毒素检查用水ml,得EU/ml；⑩、取第步溶液ml+细菌内毒索检查用水ml,得EU/ml；2-2、待复核蛍试剂的准备⑦、取第⑥步溶液0.5ml+细菌内毒素检查用水0.5ml,得0.06EU/ml；取规格为0.1ml/支的蛍试剂18支，放在试管架上，排

4、成5列，其中4列4支,1列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.lnil检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。2-4、加样4支4列每列分别加入0.1ml的0.5EU/ml>0.25EU/ml、0.125EU/ml和0.06EU/ml的内毒索标准溶液，另2支加入0.1ml的检查用水作为阴性对照。加样结束后，将蛍试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同试管架放入37°C水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60分钟。2-5.结果记录及计算方法内毒索浓度0.50.25

5、0.1250.06C反应终点平1行2管3数4Xc=lg-1(EX/4)二lg_1((lg+lg+lg+lg)/4)二EU/ml三、样品常规检查1、限值L=0.15EU/mg（中国药典2005版）。2、计算IVDMVD=CL/入=100X0.15H-0.25=603、供试品溶液的制备将样品利巴韦林注射液稀释到30倍和60倍备用。①、取原溶液0.2ml+细菌内毒素检查用水1.8ml,得10倍;②、取第①步溶液0.5ml+细菌内毒素检查用水1.0ml,得型倍；③、取第②步溶液1.0ml+细菌内毒素检查用水1.0ml,得阻倍；4、蛍

6、试剂的准备取规格为0.1ml/支的蛍试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.lnil检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。4、操作加样4-1.样品阳性对照：（做2管）取利巴韦林注射液的30倍稀释液和浓度为1.OEU/ml的内毒素稀释液各0.3ml混合均匀,取该混合液0.bnl加入已经复溶好的蛍试剂（X=0.25EU/ml）中即可。4-2、阳性对照:（做2管）取0.lml浓度为0.5EU/ml的内毒素稀释液加入已经复溶好的蛍试剂（入

7、二0.25EU/ml）中即可。4-3、样品检查：（做2管）取利巴韦林注射液的60倍稀释液加入已经复溶好的崔试剂（入二0・25EU/nil）中即可。4-3.阴性对照：（做2管）取0.lml细菌内毒素检查用水加入己经复溶好的蠻试剂（入二0・25EU/ml）中即可。5、结果记录阳性对照阴性对照样品阳性对照样品管结果是否冇效结果判断