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1、关于19病毒对先天性心脏病先天感染的探证及电镜观察作者：王晓明张国成韩美玉【关键词】先天性心脏病关键词：先天性心脏病;微小病壽B19;显微镜检查，电子摘要：目的证实部分先天性心脏病(CHD)患者心肌组织中微小病毒B19系先天感染所致,并观察CHD心肌组织超微结构变化.方法采用ELISA,PCR,原位杂交(ISH)及透射电镜等技术，对42例CHD患者及对照组22例风湿性心瓣膜病患者的外周血、活检心肌组织分别进行B19-VP2-IgM,B19-DNA的检测，并用透射电镜对心肌细胞的超微结构进行观察.结果①CHD组中B19-V
2、P2-IgM阳性3例(7%),对照组中阳性1例(5%),两组间无显著差异(P>0.05);(§)CHD组中B19-DNA阳性8例(19%),与对照组均阴性相比有显著性差异(PKeywordscongenitalheartdisease;parvovirusB19;mi-croscopy,electronAbstract:AIMTotestiftheparvovirusB19infectionincar-diactissueincongenitalheartdisease(CHD)iscongenital,andtoobs
3、ervetheultrastructuralfeaturesofcardiactissueofCHD.METHODSByusingELISA,B19-VP2-IgMwasdetectedinperipheralblood,andusin£PCRandISH,B19-DNAwasdetectedincardiactissuefrom42patientswithcongenitalheartdiseaseand22healthcontrols;ultrastruc-turewasobservedbyelectronmicro
4、scopyforB19-DNAposi-tivecardiactissueofCHD.RESULTS①B19-IgMpositiverateswere4.7%and4.l%inperipheralbloodofCHDandcontrols,respectively.Therewasnosignificantdifference(P>0.05).②B19-DNApositiverateswere19.l%and0%incardiactissueofCHDandcontrolrespectively.Nosignificsn
5、tdifferencewasseen(P19isconfirmedtobecongenitalandB19-DNAmightbointogart-edwithnucleicacidwithinhostcell.0引言微小病毒B19(ParvovirusB19)是近10余年來新近发现的与人类疾病密切相关的病原体，现己证实，它可以引起感染性红斑、关节病、血液系统疾病等多种人类疾病，宫内感染可引起非免疫性胎儿水肿、流产和死胎［1］.B19可致少数其他畸形［2-7］，可否引起胎儿先天心脏畸形目前诡未见报道•我们曾发现先天性心脏病
6、(CHD)心肌组织小有较高的B19-DNA检出率［8］,为此,我们采HjELISA,Nest-PCR和ISH技术，从外周血抗体、心脏组织中病毒基因的检测及病壽基因的定位3个层次进行研究.1材料和方法1.1材料42例CHD均系临床及手术确诊.取材于本院心脏外科1996-09/1999-01住院的部分CHD患者行修补手术屮活检心脏组织及外周血.年龄18日龄〜18岁，平均3.2岁，其屮新生儿5例（年龄W28日龄）；29日龄〜3岁（含3岁）18例;3岁〜12岁（含12岁）16例；人于12岁3例.对照纟fl22例风湿性心瓣膜病标木
7、系同期瓣膜修补术屮活检心肌组织及外周血，年龄24-46岁，平均32.4岁.1.2方法1.2.1ELTSA检测B19-VP2-IgMB19-VP2-IgMELTSA检测试剂盒购自德国TBLhamburg公司•试验步骤为:①待检血清1：100倍稀释（标准抗体液B及阳性对照1：10倍稀释），取100uL加入重组B19-VP2包被的反应孔中，37°C孵育lh.②用洗涤液3〜5次，每次3〜5min.③过氧化物酶标记的羊抗人多克隆抗体TgMIOOuL,37°C孵育30min,④重复步骤②，⑤加TMB底物液100uL,室温放置lOmi
8、n.®加终止液100uL,在A450nm处15min内读取结果,结果判定：以标准抗体液（B液）吸光度20.0%标准差为界值，待测孔吸光度大于其上限的为阳性.1.2.2巢式PCR检测B19-DNAB19病毒DNA质粒来自沙特皇家医院研究中心（KFSHResearchCenter）,其他试剂系Promega公司及华美公司
