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1、浅谈鱼肉中的恩诺沙星和环丙沙星残留检测的体会摘要：本方法样品经无水硫酸钠脱水，甲酸-乙睛提取，提取液用正己烷净化，旋转蒸发，流动相洗脱，用带荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。该方法在2~300ng/mL线性关系良好，环丙沙星回收率在71.3%〜89.5%,恩诺沙星的回收率在77.3%〜103.4%,变异系数W10%,鱼肉中环丙沙星检出限为0.48?g/kg,恩诺沙星检出限为0.32?g/kgo本方法可以满足对鱼肉组织屮坏丙沙星和恩诺沙星的检测要求。关键词：恩诺沙星环丙沙星高效液相色谱法刖§环丙沙星(Ciprofloxaci
2、n,CIP)和恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)均属于第3代氟嗪诺酮类药物(quinolones,QNs),具冇广谱抗菌活性，杀菌效果好，对革兰氏阴性菌最有效，广泛用于水产养殖中疾病的治疗，成为水产养殖中重要的抗感染药物Z—［1］。此外，环丙沙星还是恩诺沙星的主要活性代谢物之一［2］。但是由于致病菌产生耐药•性和某些QNs的潜在致癌性质，莫残留问题已引起广泛关注［1］。欧盟和北美等国家已禁止环丙沙星在水产养殖业屮使用，2002年屮国农业部也将该药列为水产养殖禁用药物。美国和欧盟许多国家规定环内沙星、恩诺沙星残留限量为30?
3、g/kg［3］。一、材料与方法(-)仪器设备及试剂材料（二）试验方法样品经无水硫酸钠脱水，甲酸-乙腊提取，提取液用正己烷净化，旋转蒸发，流动相洗脱，用带荧光检测器的高效液相色谱仪测怎，外标法足量。1•提取准确称取样品5.Og于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入5g无水硫酸钠和20mL甲酸-乙腊溶液，用均质器均质lmin,然后，于离心机上以4000rpm离心5min,将上清液移入另一50mL离心管屮，将离心残渣用20mL甲酸-乙月青溶液再提取一次，合并上清液。2.浓缩净化将上清液转移到125mL分液漏斗中，于上清液中加入25mL乙月青饱
4、和的正己烷，振摇2min,弃去上层溶液，将下层溶液移至lOOmL鸡心瓶中，于40°C水浴屮旋转蒸发至近干，用氮气流吹干。准确加入LOmL流动相溶解残渣，涡流混合后，用0.45?ni—次性滤膜过滤至样品瓶中，供高效液相色谱仪测定。3.色谱条件4•标准曲线的绘制准确称取恩诺沙星、坏丙沙星对照品各50mg,用0.03M氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为lmg/mL的储备液，置2〜8°C冰箱中保存，有效期一个月。临用时用乙膳稀释成适宜浓度的恩诺沙星、环丙沙星标准工作液。进液相色谱仪测定，根据峰面积和浓度绘制标准曲线。二、结果(-)定性判断在上述
5、色谱条件下，対标准工作液进行测定，以保留时间作为该物质的定性判断标准。环丙沙星的保留时间为14.6min,恩诺沙星的保留时间为20.5min0(-)环丙沙星、恩诺沙星标准曲线范围及相关性(三)环丙沙星、恩诺沙星检出限(LOD)以阴性鱼肉样品稀释成20ug/kg的环丙沙星、恩诺沙星标准溶液。经前处理分析测定环丙沙星标准溶液信噪比(S/N)为124.729,恩诺沙星信噪比(S/N)为188.835oL0D=3C/(S/N),其中C为添加浓度?g/kg,S/N为信噪比。本方法角肉中环丙沙星检出限为0.48?g/kg,恩诺沙星检出限为0.3
6、2?g/kg0(四)鱼肉中环丙沙星和恩诺沙星的加标回收率和变异系数三、结果分析及体会木方法在样品处理过程釆用了匀浆、脱水、离心、脱脂、浓缩的提取过程，没有采用固相萃収净化，使得样品的预处理过程相对简化，检测成本更低，一且色谱峰有较好的峰形和分离度，结果的变异系数均在10%以内，环丙沙星回收率在71.3%〜89.5%,恩诺沙星的回收率在77.3%〜103.4%,检出限均小于0.5?g/kg,可以满足对鱼肉组织屮环丙沙星和恩诺沙星的检测耍求。目前，用于检测嚨诺酮类药物残留的方法主要有微生物法、免疫分析法、高效液相色谱法(IIPLC)、液
7、相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)等。其中微生物法的检测限常高于唾诺酮类药物的MRLs,不够灵敏；LC-MS/MS法因所用的仪器要求高，价格昂贵，未能普及使用；HPI.C是已报道用于嗥诺酮类药物残留检测最常用的方法［4］,具有高效、快速、灵敏度高、检出率高等特点。本方法对高效液相色谱法测定水产品中的环丙沙星和恩诺沙星残留量进行了改进研究，建立一种简便、快捷、经济、准确、灵敏，满足国内外有关法规要求的方法。参考文献［1］刘丽贞，周婉苹，薛冰；高效液相色谱-荧光检测法同时测定鱼肉组织屮的诺氟沙星环丙沙星和恩诺沙星残留［J］;屮国卫生
8、检验杂志：2008,18(7)：1296-1298.［2］徐亚萍，丁红云，潘海祥；高效液相色谱-紫外-荧光测定水产品中环丙沙星［J］；中国卫生检验杂志，2007,17(6)：977-979.［3］张乐•水产品中环丙沙星残留量检测方法的
