《DB13T1384.7-2011-饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定》.pdf

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1、ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.7—2011饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定Determinationofenrofloxacin/ciprofloxacin/norfloxacininfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.7—2011前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北省医科大学、北京出入境检验检疫局技术中心、石家庄市疾病预防控制中心、河北省饲料产品质量监督检验

2、站。本标准主要起草人：张岩、李挥、吕品、丛斌、卢小宇、张宏、范斌、贾茜、马春玲、米振杰、杨立学、李志平、沈磊、高振同、武英利。IDB13/T1384.7—2011饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星的测定1范围本标准规定了饲料中恩诺沙星，环丙沙星，诺氟沙星的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中恩诺沙星，环丙沙星，诺氟沙星的测定。本标准的方法检出限为10.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验

3、室用水规则和试验方法（GB/T6682－2008，ISO3696:1987,MOD）。3方法提要试样加入内标后，氢氧化钠溶液提取，离子化的喹诺酮类药物经过阴离子交换固相萃取柱富集净化，用液相色谱-质谱/质谱法测定，梯度洗脱，内标法定量。4试剂与材料除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：HPLC级。4.2氢氧化钠。4.3甲酸（85％）。4.4阴离子交换柱（PAX）：60mg，3mL，或相当者。4.5同位素内标：氘代诺氟沙星，纯度≥98％。4.6恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准品：纯度≥99％。4.7恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准

4、储备溶液：1mg/mL。准确称取适量的恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准品，甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液储备在4℃冰箱中，可保存6个月。4.8恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星标准工作溶液：用甲醇－水（2＋8，体积比）分别配成浓度范围为1ng/mL～60ng/mL标准工作溶液，其中内标溶液浓度为50ng/mL，现配。4.9氘代诺氟沙星（NOR－D5）内标储备溶液：100µg/mL。称取适量的NOR－D5内标物（4.5），用甲醇（4.1）配成100µg/mL储备液，储备液储存在4℃冰箱中。4.10氘代诺氟沙星（NOR－D5）内标储备溶液：1µg/mL。取适量的内标

5、储备液（4.8），用甲醇（4.1）稀释成100µg/mL储备液，内标工作溶液在4℃下保存。4.11氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：取4g氢氧化钠，溶解于1L水中。4.12甲酸-甲醇溶液（5＋95，体积比）：取5mL甲酸（4.3）于80mL水中，混合均匀。1DB13/T1384.7—20115仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾粒子源。5.2分析天平：感量0.001g，0.1mg，各一台。5.3旋转蒸发仪。5.4固相萃取装置。5.5涡旋均混器。5.6真空泵：真空度不低于80kPa。5.7滤膜：有机系，0.45µm。5.8离心管：100mL，具塞。6试样的制备6

6、.1提取准确称取5g样品（精确至0.01g），置于100mL离心管中，加经灼烧的无水硫酸钠，用干净玻璃棒将样品与无水硫酸钠搅拌分散均匀，准确加入1µg/mL内标溶液50µL，加入20mL氢氧化钠溶液，于涡旋均匀器上快速混匀。以5000r/min的速度离心5min，上清液移入125mL分液漏斗中，加20mL正己烷混合，涡漩振荡，静置分层，取下层水相待净化。6.2净化依次用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱，将样品溶液转移到小柱上，依次用水、甲醇淋洗，弃去上述滤液。用甲酸-甲醇溶液3mL洗脱。40℃水浴旋转蒸发至干，用甲醇-水定容1.0mL,过0.45µm的滤膜到进样瓶中，

7、供液相色谱-质谱仪测定。7测定步骤7.1测定7.1.1参考液相色谱条件色谱柱：C18，3µm，150mm×2.0mm(内径)或相当者。流动相：甲醇（A）+0.1%甲酸水溶液（B）。流速：0.20mL/min。梯度洗脱程序：参见表1。柱温：室温。进样量：25µL。2DB13/T1384.7—2011表1梯度洗脱程序时间（min）A（％）B（％）010902.0010904.0090108.0090109.00109015.0010907.1.2参考质谱条件离子源：电喷雾离子源。扫描方式：正离子扫描。检测方式：多反应监测。电喷雾电压、碰撞电压