dbs43 005-2013 水产品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量测定 高效液相色谱法

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1、SN××/T××××—××××湖南省卫生厅发布2013-12-01实施2013-10-01发布水产品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量测定高效液相色谱法DBS43/005—2013湖南省食品安全地方标准IDBS43/005—2013前言本标准首次发布。3DBS43/005—2013水产品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量测定高效液相色谱法1　范围本标准规定了新鲜及冷冻水产品中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于新鲜及冷冻水产品可食部分氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星残留量的测定。2　规范性引用文件下列文件

2、对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。3　方法提要采用酸性水溶液提取试样中待测物，经固相萃取柱净化，用带荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。4　试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1　乙腈:色谱纯。4.2　甲醇:色谱纯。4.3　磷酸：优级纯。4.5四丁基溴化铵。4.67mmol/L四丁基溴化铵（pH3.0，pH2.0，pH1.0）：称取2.26g四丁基溴化铵，溶解于1L水中。用适量磷酸调pH至所需的值。4.

3、75%甲醇水溶液：取5.0mL甲醇加水稀释到100mL。4.8流动相：乙腈+四丁基溴化铵溶液（7mmol/L,pH3.0）=6+94(V+V)。4.9标准物质：氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星，纯度均高于98.0%。4.10标准储备液：分别称取10.0mg（精确到0.01mg）氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星标准物质，用乙腈溶解，定容至100mL，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液。4℃冰箱中冷藏避光保存，保存期不超过3个月。4.11混合标准中间液：准确移取适量各标准储备液，用乙腈稀释，配制成浓度为1mg/L的混合标准中间液。4℃冰箱中冷藏避光保存，保存期不超

4、过一周。4.12标准工作溶液：准确移取适量的混合标准中间液，用流动相稀释,配制成2µg/L、5µg/L、25µg/L、50µg/L、500µg/L系列标准工作溶液。临用前配制。4.13微孔滤膜：0.22μm，有机相型。4.14OasisHLB小柱：60mg/3mL，或者性能相当者。注：OasisHLB是由Waters公司提供的产品商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不涉及商业目的。鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的固相萃取小柱。5　仪器和设备3DBS43/005—20131.1　高效液相色谱仪，带荧光检测器。1.2　分析天平：感量0.01mg和0.01g。1.3　旋

5、涡混匀器。1.4　离心机:5000r/min。5.6水浴超声器。5.7氮吹仪。5.8离心管：50mL。5.9玻璃试管：5mL。5.10pH计。5.11固相萃取装置。2　分析测定6.1样品制备冷冻样品在进行制备前，需拿出在常温下回温散冻。然后按照以下处理方法进行样品制备。所有样品只取可食部分。鱼：去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾、蟹类：去头、去壳、去肠线，取肌肉部分。样品切成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后,置于研磨机中研磨均匀。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。制备好的样品置于-18℃保存。6.2提取准确称取样品(5±0.05)g,置于5

6、0mL离心管中,加入8.0mL四丁基溴化铵溶液(7mmol/L,pH2.0)，涡旋混合1min后，超声提取20min，再以5000r/min离心10min。收集全部上清液于另一只干净的离心管中。将残渣重复上述步骤提取一次。合并上清液，用四丁基溴化铵溶液(7mmol/L,pH2.0)定容至20.0mL，以5000r/min离心10min，上清液待用。6.3净化固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL四丁基溴化铵溶液（7mmol/L,pH1.0）活化后，准确移取上述上清液2.0mL上样。再依次用3mL四丁基溴化铵溶液（7mmol/L,pH1.0）、2mL5%甲醇水淋洗，抽干。最后用3mL

7、甲醇洗脱，收集洗脱液于小玻璃试管中，45℃下氮气吹干。用1.0mL流动相溶解残留物，涡旋混匀后,经微孔滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱分析。6.4高效液相色谱测定6.4.1参考色谱条件色谱柱：AtlanticT3柱(150×4.6mm，粒径5μm)，或其它等效柱。流动相：乙腈+四丁基溴化铵溶液（7mmol/L,pH3.0）=6+94（v+v）。流速：1mL/min。进样量：20µL。柱温：40℃。检测波长：氧氟沙星λex=283nm,λem=490nm,其余：λex=280nm,λem