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1、APR3多克隆抗体的制备和鉴定丁晓东】，张惠文2上海交通大学医学院附属新华医院，上海市儿科医学研究所，上海200092摘要：目的：针对小鼠凋亡相关蛋白3制备多克隆抗体。方法：合成针对小鼠APR3cDNA文库对应翻译的氨基酸序列并加保护后藕联载体免疫2只新西兰纯种大门兔，获収免疫血清共50ml,经蛋白A柱纯化及抗原抗体亲和纯化庇采用Western-blot及免疫细胞化学染色进行特异性鉴定。结果：构建了针对小鼠APR3cDNA文库所对应两种序列所对应的抗体，经检测证实其中一个抗体Westernblo
2、t证明能特异性性识别小鼠组织及NIH-3T3细胞。结论：成功制备了能特界性识别小鼠APR3的多克隆抗体。关键词：凋亡相关蛋门3；多克隆抗体；制备；鉴定中图分类号：R257DevelopmentandcharacterizationofantibodytoAPR3DingXiaodong,ZhangHuiwen（XinhuaHospitalaffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversityMedicalSchool,ShanghaiInstituteforPediatri
3、cResearch,Shanghai200092）Abstract:APR3isanovelproteinwithunknownfunction.Goodantibodyisessentialtoitsfunctionsludy.CurrentlythereisnocommercialantibodyagainstmouseAPR3.TodevelopantibodyagainstmouseAPR3,wesynthesizedtwopeptidesofAPR3toimmunerabbit・The
4、serumsfromimmunizedrabbitswerefurtherpurifiedbyaffinitychromatography.ThespecificitywascheckedbyWesternBlotandimmunity,whichdemonstratedabandatthepredictedmolecularweight.Inconclusion,anantibodyspecifictomouseAPR3wasdeveloped・Keywords:APR3;poluclonal
5、antibody;development;characterization0引言凋亡和关蛋白3（apoptosisrelatedprotein3,APR3）是基于PCR减法杂交技术从全反式维屮酸（ATRA）诱导人HL-60细胞分化时得到的一个新基因。反向杂交检测认为英与细胞凋亡相关，还可能与血细胞的发生与分化有关。另有研究发现APR3可将细胞周期阻滞于G1/S期。其定位于2号染色体的短臂23区3带。在Pubmcd数据库屮小鼠APR3cDNA文库有两个序列，分别为cDNAcloneMGC:6136
6、8IMAGE:5714599和cDNAcloneMGC:58396IMAGE:6585654二者分别山979bp和876bp,分别编码223和162个氨基酸，后者竣基端的155个氨基酸与前者的竣基端完全一致，为便于讨论我们将较长者称之为APR3L,较短者称之为APR3S。H前•所有APR3的商品化试剂均为根据人的序列设计，对小鼠APR3的检测作用未知。为此我们设计了针对二者不同肽段的氮基酸序列制备对应的多克隆抗体，从而为进一步研究APR3分子在体外及体内的生物学作用打下基础，现报告如下。1材料与
7、方法1.1主要试剂弗氏完全及不完全佐剂（sigma公司）,HRP标记羊抗兔及兔抗羊（Beyotime公司）；RIPA基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（200802481048）作者•简介：丁晓东（1977-）,男，主治医生，遗传代谢病通信联系人：张惠文（1974-）,女,副研究员，小儿内分泌遗传代谢E-mail:huiwenzhang@yahoo.com（强）裂解液（Beyotime）,BCA蛋白浓度测尬试剂盒、ECL化学发光试剂盒及PVDF膜（Millipore公司）；免疫细胞
8、化学抗荧光淬灭试剂盒（DAKO公司）；-其余化学试剂均为国产分析纯和生化试剂。1.2实验动物清洁剂健康新西兰纯种人白兔2只，8-10周龄B129品系黑鼠均购Z于上海必凯实验动物中心，许可证号（20103KSD）。NIH-3T3细胞株购Z于中国科学院上海生命科学研究院••细胞资源中心。1.3多肽合成与载体藕联针对APR3L氨基酸序列的前15个氨基酸（1-15：MASRESGGSRAAALL）,APR3S的32-47位氨基酸（DLQANPLKDDLANTFR）合成多肽，为增加合成多肽的稳眾性分别对A
