延边地区慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的检测及其临床意义

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延边大学硕士学位论文延边地区慢性丙型肝炎患者血清中口身抗体的检测及其临床意X姓名：许顺姬中请学位级别：硕士专业：生理学指导教师：金元哲20070530 英文缩略写缩略词英文全称中文全称ACLanti-cardiolipinantibody抗心卵磷脂抗体AIH-1autoimmunehepatitis自身免疫性肝炎J型ALTalanineaminotranseferase丙氨酸氨基转移酶ALBalbumin白蛋白ANAanti-nuclearantibody抗核抗体AMAanti-mitochedridantibody抗线粒体抗体ASAanti-smoothmuscleantibody抗平滑肌抗体ASTaspartatearrunotranseferase天门冬氨酸转移酶HBsAgHepatitisBVirusSantigen■乙型肝炎病毒HCVViralhepatitisC丙型肝炎病毒HCV-RNAViralhepatitisC-RNA丙型肝炎病毒-核糖核酸际临床化学联合会IFCCIntematyionalFederationofClinicalChemistryIIFIndirectImmunofluorescenceAssye间接免疫荧光法 IFNInterference干扰素RFRhenmatoidFactor类风湿因子 目的：分析延边地区慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体阳性率及其临床意义。方法：选择100名慢性丙型肝炎患者(慢性肝炎79例,肝硬化21例)，检测自身抗体(ACL,ANA,ASA,AMA,RF)阳性率，并比较自身抗体(+)及自身抗体(・)群年龄.性别、肝功能状态。结果：慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体至少一种阳性的62例。ACL阳性40例最多，其次为ANA阳性29例，RF阳性19例，ASA阳性8例，AMA阳性3例。另外，自身抗体阳性组和阴性组有关因素比较发现，自身抗体阳性组较阴性组年龄大(58.7岁V549.7岁)、女性多见(79・2%w46.2%)、肝功能状态及肝病状态差。结论慢性丙型肝炎血清中常出现自身抗体，自身抗体出现可影响肝功能状态，加重病情，在临床诊疗中应慎重。关键词：延边地区：自身抗体：丙型慢性肝炎;Abstract：FDetectionandclinicalsignificanceofautoantibodiesinserumofpatientswithchronicHepatitisCinYanbianareaAIM:ToanalyzethepositiverateofautoantibodiesinpatientswithchronicchronicHepatitisCandtheirclini-calsignifi ■cances.METHODS:Thepositiverateofautoantibodiesincludinganti-cardiolipin(ALC),anti-nuclear(ANA),an-tismoothmuscle(ASA),anti-mitochondrial(AMA)an-tibodies,andrheumatiodfactor(RF)weredetectedin100patientswithchronicHepatitisC(79chronichepatitisC,21live.cirrhosis)・Andthefactorssuchasage,gender,andliverfunction,betweenpatientswithautoantibodiespositiveandnegativewerecompared.RESULTS:Theoverallpositiverateoftheautoanti-bodieswas62.0%.ThepositiverateofACL,ANA,RF,ASA,andAMAwas40.0%,29.0%,19.0%,8.0%,and3.0%,respectively.Ascomparedwiththeautoantibody-negativepatients>theautoantibody-positivepatientshepatitisC,21livercirrhosis)・Andthefactorssuchwereorder(5&7vs49.7),andwithworseliverfunctionanddiseasestatus.Thepositiveexpressionofautoan-tibodywasfoundhigherinfemalesthanthoseinmales(79.2%vs46.2%).CONCLUSION:TheautoantibodiesarecommonlyfoundinpatientswithchronichqpatitisC.Itspresencemayinfectthestatusoftheliverfunctionandaggra-vatethestateofthedisease.KeyWords:Yanbiaarea;Autoantibody;HepatitisCvirus 慢性丙型肝炎（ViralhepatitisCHCV）是由丙型肝炎病毒感染所致的一种肝脏的慢性炎症性疾病，易发展成肝硬化，并与原发性肝细胞癌的关系密切。据估计，全球约有1.7亿慢性丙型肝炎感染者。在日本和欧美等国家，慢性丙型肝炎感染是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的主要病因。慢性肝脏疾病常伴有自身免疫现象，其临床表现依病因而异，除自身免疫性肝炎外，乙型.丙型和丁型病毒性肝炎也可出现自身免疫现象，其中慢性丙型肝炎诱导的自身免疫现象最为常见，约占丙型肝炎患者的1/3冋。HCV的主要肝外免疫现象之一是自身抗体的存在。目前慢性丙型肝炎感染与自身免疫的关系受到众多学•近几年的研究发现丙型肝炎感染的患者血清中可检测到一种以上的自身抗体©°,在慢性丙型肝炎患者血清中的ANA和AMA的检出率均髙于健康人⑷，杨道锋等用免疫学方法检测丙型肝炎患者血清中的自身抗体，结果发现患者血清中存在抗核抗体（ANA）.抗平滑肌抗体（ASA）.抗线粒体抗体（AMA）■类风湿因子（RF）、抗甲状腺球蛋白抗体（抗・TG）、抗微粒体抗体（抗・TM）⑶文献报道自身免疫的启动因子是HCV病毒感染，靶细胞中的抗原成分发生改变或者由于病毒蛋白正常组分间有同源性而诱发自身免疫，并认为HCV感染可通过分子模拟现象激活自身反应性CD&T细胞，从而诱导自身免疫⑴。 自身抗体阳性的丙型肝炎患者，临床上多见血清ALT及Y■球蛋白升高⑷，且存在明显的自身免疫现象。自身抗体的种类常与AIH时出现的自身抗体相似，有时甚至与自身免疫性肝炎难以区别⑻,自身免疫性肝炎经激素治疗可以降低死亡率，但慢性丙型肝炎用激素反而增加病毒复制，加重病情⑼⑼，所以慢性丙型肝炎自身免疫现象与自身免疫性肝炎的鉴别对制定治疗方案具有重要意义。■不同地区，不同种族的慢性丙型肝炎患者出现自身免疫现象可能不同，这可能与HCV基因类型不同有关“⑵。本文分析了延边地区慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的存在与否及对自身抗体阳性与阴性是否影响肝功能状态，对ALT.AST、ALB进行比较，这对了解延边地区慢性丙型肝炎患者出现自身免疫现象程度及慢性丙型肝炎临床诊断及治疗具有重要的临床意义。 第二章材料与方法1材料1.1研究对象和诊断标准随机选取2005年2月到2006年12月间在本院住院的慢性丙型肝病患者100例。其中男52例.女48例，年龄从46岁到62岁，平均年龄54.4±7・8岁。临床分型为，慢性丙型肝炎79例，合并肝硬化21例。均为抗HCV阳性，HCV-RNA阳性，HBsAg阴性，均未接受过干扰素治疗的患者。诊断符合2000年全国病毒性肝炎防治方案中规定的丙型肝炎诊断标准少】。2方法抽取患者静脉血，分离血清，保存于-20°C冰箱待测。2.1血清抗核抗体(ANA),抗平滑肌抗体(ASA),抗线粒体抗体(AMA)的检测以猴肝组织和Hep-2细胞作为基质制成生物薄片作为抗原，间接免疫荧光法(IIF)测定血清ANA.ASA.AMA.ACL。试剂盒由德国欧蒙实验免疫制品有限公司提供，该试剂盒将猴肝组织和Hep-2细胞制作成超微薄片固定在同一抗原基质区，对同一份标本进行平行测定。血清经1：100稀释后与基质温育，经洗涤，再与异硫氤酸荧光素(F1TC)标记的羊抗人球蛋白(IgGHgA+IgM),温育、洗涤，最后在荧光显微镜下根据特异的荧光图型，判断结果。猴肝组织和Hep-2细胞均特异性荧光者为阴性。而猴肝组织和Hep-2细胞产生的明显荧光者为阳性。具体操作步骤如下:稀释：用磷酸盐缓冲液（PBS-Tween20）稀释血清。阳性和阴性对照不需稀释，使用前要混匀，每次实验均须做对照。加样：将加样板放在泡沫板上，按顺序分别滴加25jd稀释后的血清至加样板的反应区中，避免产生气泡。滴加完所有待测标本后开始温育一次最多20份）。 第一次温育：将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里，反应立即开始。确保每一个标本均与生物薄片接触，且标本间互不接触。室温温育30分钟。清洗：用烧杯盛磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟注意水流不要太急，不要直接对着基质冲），然后立即不要吹干，将其浸入装有磷酸盐缓冲液的小杯中浸洗至少1分钟。不需振荡。加样：滴加20glFITC标记的抗人免疫球蛋白结合物至洁净加样板的反应区中，完全加完所有的二抗后，方可继续温育。注意：FITC标记的抗人免疫球蛋白使用前需混匀。为节约时间，可在第一步温育的同时滴加荧光二抗至另一个加样板的反应区中。第二次温育：从磷酸盐缓冲液中取出一张载片，5秒钟内用吸水纸擦一下背面和缘后，立即将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里。注意：为防止破坏基质，不要擦拭反应区的间隙。检査生物薄片是否与液滴接触良好，然后继续下一张。室温温育30分钟。以后的各种程序应该注意避免阳光直射载片。清洗：用烧杯盛磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟注意水流不要太急，不要直接对着基质冲），然后立即将其浸入装有磷酸盐缓冲液的小杯中浸洗至少I分钟。可在每150ml磷酸盐缓冲液中加10滴伊 文氏蓝作为衬染。U!封片：将盖玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加甘油/PBS至盖玻片，每一个反应区约lOglo从磷酸盐缓冲液中取岀一张载片，用纸擦干背面和四边，注意不要擦拭反应区间隙。将载片覆有生物薄片的一面朝下放在已准备好的盖玻片上，立即査看并轻轻调整使盖玻片嵌入到载片的凹槽里，然后继续下一张。显微镜下检査：Olympus荧光显微镜下，根据特异的荧光图型，判断结果。猴肝组织和Hep・2细胞均特异性荧光者为阴性。而猴肝组织和Hep-2细胞产生的明显荧光者为阳性。抗体的滴度大于1：100判断为阳性J2.2抗心磷脂抗体（ACL）•类风湿因子（RF）的检测和各种生化指标的检测用日立7600-010型全自动生化分析仪采用免疫散射比浊法检测ACL、RF,速率法检测ALT、AST,终点法检测ALB。以上方法均参照IFCC推荐的方法；试剂和标准物由上海复兴长征有限公司提供：实验参数和操作根据试剂说明书，由室内质控控制实验的准确性和精密度。2.3抗HCV和HCV・RNA的检测ELAIS法检测抗HCV：血清标本利用意大利产ALISEI全自动酶联免疫分析仪。检测抗HCV试剂由厦门新创公司提供的酶联免疫试剂盒。血清lOOgi加到已包被于HCV结构核心蛋白的非结构区蛋白混合抗原的微孔上，使抗HCV与包被抗原特异性反应，振荡、混均、用不干胶片封板，置37°C,20分钟。然后加入过氧化物酶标记的抗IgG抗体第二抗体）100四孔，形成抗原航体■酶标记第二抗体复合物洗涤4次，再加底物，酶催化底物显色，加终止液。每次结果均设阴阳性对照。检测结果判断，经双波长（600/650nm）比色后，抗・HCV结果cutoff值习为阴性对照组，其中0D值小于0.05时按0.05计算，并设为阳性。抗・HCV结果如果cutoffd13000rpm振荡5秒一►离心15分、13000rpm-取0.5ml灭菌离心液，加入异丙醇100皿一振荡5秒—离心15分.13000rpm->轻轻倒去上清液，倒置吸水纸上，沾于液体t加入乙醇300gR75%-离心10分.13000rpmT轻轻倒去上清液，倒置吸水纸上，沾于液体-离心5秒、2000rpm-降底部少量液用微量加样器吸干，室温干燥1-5分-干燥的沉淀物中加入15plDEPC水，轻轻混均，溶解管壁上的RNAo实验均同时带阴阳对照。从试剂盒中拿出RT-PCR反应液RT-PCR34.1jil.RT-PCR酶0.5pl,PCREnhancer0.4ph向n个反应管中各分装35皿。盖好反应管盖，放入荧光PCR器内扩增。循环程序如下设置42°C30分，95°C3分，95°C10秒，55°C30秒，72°C60秒，5个循环95°C5秒，60°C30秒。40个循环。结果循环复合物选双波长450/630nm）,进行比色读取A值,'结果判定，阴性对照A值小于0.05时按0.05计算），标本A值Ncutoff值，判断为阳性，否则阴性。每次结果均设阴阳对照。3统计学分析利用SPSS10.0统计学处理系统，两组间比较采用/检验。设定P<0.05具有统计学意义。所有数据均以均数土标准差表示。第三章结果1100例慢性丙型肝炎患者自身抗体检测状况在100例延边医院住院的慢性丙型肝炎患者中男性占52例，女性占48例。其中血清内5种自身抗体检测中发现，至少有一个阳性的62例，占整个测试对象的62.0%o其中男24例（占男性患者的46.2%）.女性38例（占女性患者的79.2%）。ACL阳性最多40例（占40.0%）,其次为ANA 阳性29例（占29.0%）,RF阳性19例（19.0%）,ASA阳性8例（&0%）,AMA阳性3例（3.0%）。女性患者每一种自身抗体阳性率均高于男性（见表1）。表1.100例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体检出率（n,%）男(n=52)%女(n=48)%合计（n=100）自身抗体24(46.2)38(79.2)62(62.0)ACL15(28.8〉25(52.1)40(40.0)ANA11(21.2)18(37.5)29(29.0)RF9(17.3)10(20.8)19(19.0)ASA3(5.8)5(10.4)8(8.0)AMA1(1.9)2(4.2)3(3.0) 图1100例慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体的检测■女口男2慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体阳性的患者性别、年龄比较自身抗体阳性组和阴性比较，结果发现自身抗体阳性组较阴性组年龄大，分别是58.7岁和49.7岁，女性多见79.2%,男性为46.2%,自身抗体阳性慢性丙型肝炎的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,普遍高于自身抗体阴性患者，白蛋白（ALB）低于自身抗体阴性患者。两组间年龄.ALT.AST、ALB比较差异有显著性意义（PV0.05）。见表2。表2.自身抗体表达与年龄、性别.肝功关系比较自抗阳性（n=62）自抗阴tt(n=38)年龄58.7±10.149.7土9.2*性别（M/F）24/3828/10ALT(IU/L)152.2±100.273.9±55.2・AST(IU/L)142.1±99.884」±64.9・ALB(g/L)2&3士4.235.5士4.7・・自身抗体阳性与自身抗体阴性组比较・PV0.05 第四章讨慢性丙型肝炎的发病与免疫因素有关(，4'l61o另外，血清中出现自身抗体时ALT明显上升w,其组织学改变类似于自身免疫性肝炎问。但也有报道两者间组织学改变及血清ALT无明显差异丙型肝炎发病机制目前认为与病毒直接作用和宿主免疫有关。宿主免疫应答一方面限制和消除病毒，另一方面又直接和间接的破坏机体自身细胞和组织而引起病理损伤。慢性丙型肝炎感染诱导自身免疫的观点至今尚未统一，大多数学者认为HCV感染可诱导自身免疫剛。自身免疫的启动因子是病毒感染，靶细胞中的抗原成分发生改变或者由于病毒蛋白与正常组织成分间有同源性而诱发自身免疫，认为HCV感染可通过分子模拟现象激活自身反应性CD8+T细胞，从而诱导自身免疫⑴。本研究结果表明,慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体出现率比较髙(62.0%),其中ACL阳性率最高占40.0%,比西方国家的报道高。ACL对慢性丙型肝炎患者血清肝细胞损伤是否起作用有待于进一步研究。ANA阳性率(29.0%).ASA阳性率(8.0%)和RF阳性率(19.0%)也较西方国家的报告高"20)oBuskila等⑷对90例HCV感染者进行了自身抗体的检测，发现69-0%的患者至少有一种自身抗体阳性反应，其中'ACL阳性率最高，其次是ANA,这与本文结果与上述结果大致一致。在HCV感染中多种自身抗体的出现，提示HCV感染可触发自身免疫反应。HCV作为外来因子可通过多种途径损害机体的免疫系统, 使机体免疫耐受遭到破坏，促进自身免疫的发生和发展。 本研究结果与以往的研究结果相比有一些差异，这可能与不同的地区、不同种族感染的HCV基因类型不同有关他役本研究结果显示,自身抗体阳性组比阴性组年龄较大（58.7岁比49.7岁）、女性较男性多见，分别为79.2%和46.2%,这与Kim等仙的研究结果相似。提示血清自身抗体出现可能与衰老、女性内分泌失调有关。余宏⑹等分析抗HCV-IgM.抗HCV-IgG阳性患者自身抗体检出率中发现HCVJgG、HCV-IgM均阳性组的自身抗体检出率大于单纯抗HCV-IgM阳性组，认为丙型肝炎病史长者的患者自身抗体阳性率高于近期感染者，丙型肝炎患者高于HCV感染后无症状者。这些结果也表明自身抗体的出现,不仅与HCV感染有关，而且与HCV感染的严重程度、病程长短有关。对丙型肝炎患者血清中IgG、IgA、IgMANA水平与自身抗体RF.ANA阳性率之间关系的研究表明⑶,性率在各种免疫球蛋白的增高组和正常组间无显著差异，揭示丙肝患者的IgG水平与其某些自身抗体（RF）的检出率有一定关系，亦说明慢性丙型肝炎患者存在针对IgG的自身免疫异常。本研究发现自身抗体阳性组和阴性组患者的ALT、AST.ALB有显著性差异，提示自身抗体阳性与病毒的复制活跃、与肝脏损伤程度及病情的进展有一定相关性。自身免疫性肝炎是与自身免疫反应密切相关的一种慢性肝病。自身抗体阳性的丙型肝炎患者，临床上多见血清ALT及丫・球蛋白升高，且存在明显的自身免疫现象。自身抗体的种类常与自身免疫性肝炎时出现的自身抗体相似，有时甚至使之与自身免疫性肝炎难以区别。因此，丙型肝炎与自身免疫性肝炎发病机制之间的关系值得重视。丙型肝炎患者检测自身抗体，不仅对认识疾病有意义，而且对治疗也有一定的指导作用。自身免疫性肝炎多用免疫抑制剂治疗，而丙型肝炎的治疗可用干扰素。干扰素在HCV感染者的治疗中，可诱发自身 免疫现象，干扰素具有清除病毒的效应外，还具有广泛的生物活性。如生长调控.抑制血管生长.调解细胞分化.增加组织相容性复合体的表达等一系列免疫调解功能。因此干扰素治疗丙型肝炎的过程中有可能诱发自身免疫发作，甚至可能诱发潜在的自身免疫发挥作用呦。干扰素既增强免疫活性，又能增加自身免疫，两者作用相反。自身抗体低滴度时，以抗病毒作用为主，高滴度时则抑制免疫反应为主。因此，在整个治疗过程中应对自身抗体滴度进行检测，随时对治疗方案作出必要的调整。总之，HCV感染者在治疗过程中如出现自身抗体，临床上必须引起高度重视，制定针对病情的治疗方案。 ・1・慢性丙型肝炎患者自身抗体阳性者年龄较大，女性多于男性；2.慢性丙型肝炎患者血清中出现ACL.ANA.ASA、AMA.RF等多种自身抗体；3.慢性丙型肝炎患者血清中出现自的自身抗体可影响肝功能状态，ALT.AST自身抗体阳性组显著性高于自身抗体阴性组。自身抗体阳性组ALB显著性低于阴性组。参考文献[1]MiyakawaH,KitazawaE,KikuchiK>etal.ImmunoreactivitytoVariousHumanCytochromeP450ProteinsofSerafromPatientswithAutoimmuneHepatitis,ChronicHepatitisB?andChronicHepatitisC[J].Autoimmunity,2001,33:23⑵ObennayerStranbP,MannsMP.HepatitisCandD,retrovimsesandautoinmunemanifestations^]JAutoinamm>200L16:275-285.［3］杨道锋，田德英，张振钢等•慢性丙型肝炎患者6种自身抗体检测的研究•临床内科学杂志，1997,14(4)：205［4］高润平，李玉香，郑永晨.慢性丙型肝炎患者自身抗体的检测分析.中国免疫学杂志，1994,10(1)：59［5］赵彩彦，王麟士，张金贵等•慢性丙型病毒性肝炎患者的自身抗体检测.临床肝胆病杂志，1997,13(2)：78［6］余宏，齐名，李保仝等•丙型肝炎病毒感染者的自身抗体分析.上海免疫学杂志，1998,18(2)：98［7］ 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及干扰素治疗诱导的自身免疫现象•临床肝胆病杂志，2004,20(4):225 慢性丙型肝炎与自身免疫性抗体相关性研究进展慢性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的肝组织的炎症性病变，表现为肝细胞功能障碍等一系列病理变化。HCV感染后体内产生有很多自身抗体存在。丙型肝炎与多种免疫异常相关现象日益受到关注，特别是对自身抗体产生的研究很受重视⑴。自身免疫功能紊乱的长期存在可能是肝细胞恶性变的原因之一⑵。检测丙型肝炎患者血清中自身抗体的变化规律，探讨自身免疫反应在丙型肝炎中的作用对丙型肝炎的治疗很有意义。本文将慢性丙型肝病与自身免疫性性抗体相关性研究做简要的总结。1.慢性肝病与自身抗体慢性丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染所致的一种慢性肝脏炎症性疾病，易发展成肝硬化并与原发性肝细胞癌有密切关系。据估计,全球约有1.7亿慢性HCV感染者。在日本和欧美等国家，慢性HCV感染是慢性肝炎.肝硬化和原发性肝癌的主要病因。自身免疫性肝炎(AIH).原发性胆汁性肝硬化(PBC)v原发性肝硬化性胆管炎(PSC)占慢性肝病的10%〜20%。其共同特点是在肝脏出现病理性炎症损伤的同时，血清中出现与肝脏相关的自身抗体，其与在此类疾病基础上的重叠综合症，并称为自身免疫性肝病。自身免疫性肝病是一种原因不明的肝脏持续性炎症性疾病，是一种伴循环自身抗体和高免疫球蛋白血症的疾患，其病因尚不明。其发病机制可能是机体免疫系统对自身抗原的免疫耐受性丧失致使其攻击自身组织抗原而导致肝组织炎性坏死有关。慢性肝病患者大部分存在免疫功能紊乱现象，发生自身■ 免疫损伤，部分肝硬化患者血清中出现抗核抗体（ANA）（3ANA阴性肝硬化患者与阳性肝硬化患者比较，出现的抗核抗体在60岁的女性患者中多见，提示血清ANA阳性出现可能与衰老.内分泌失调有关⑷。除自身免疫性肝炎外，乙型、丙型病毒性肝炎也可出现自身免疫现象，其中以丙型肝炎病毒诱导的自身免疫现象最为常见，约占丙型肝炎患者的l/3cw,o丙型肝炎的自身免疫现象之一是血清中出现自身抗体。采用间接免疫荧光法检测慢性肝炎、肝硬化和与原发性肝癌患者血清中ANA的变化规律的研究结果表明慢性肝炎.肝硬化、肝癌患者血清中不仅存在着ANA,而且其阳性核型随着病情发展而发生改变，这种改变多集中在与细胞分裂、增殖相关的核仁蛋白上。细胞核常成为自身免疫反应的重要靶子,细胞核内核仁.核内的染色质、非组蛋白以及由核糖核酸和相关的蛋白构成的各种核糖核酸粒子都可成为自身免疫攻击的靶子，产生自身抗体。ANA的耙抗原有多种,但明显与常见的自身免疫性靶抗原不同。最近研究报道⑴慢性乙型肝炎和丙型肝炎是我国慢性肝病谱主要成分，均以ANA检出率较高，慢性丙型肝炎的自身抗体的阳性率及抗体种类髙于慢性乙型肝炎，这两型病毒性肝炎ANA检测阳性患者与阴性患者的肝功能做比较，■AST.ALT有显著性差异，提示自身抗体ANA可能与病毒复制活跃、与肝脏损伤程度及病程进展有一定的相关性。张利方⑹等的研究表明慢性肝炎.肝硬化、肝癌三组患者中自身抗体阳性率均高于急性肝炎和正常对照组。表明在慢性肝炎.肝硬化患者体内存在着自身免疫反应，它可引发机体自身免疫紊乱产生自身抗体。范列英等发现⑷在中 廿人的慢性肝病和肝癌患者体内不仅存在着ANA,而且其阳性率较■离。检测中的有88%以上有HBV慢性感染病史，提示HBV感染也可弓i发自身免疫紊乱，产生自身抗体。自身抗体的类型及水平反映机体的自身免疫的紊乱状况，如果能对圧有足够的认识，有利于丙型肝炎的诊断、治疗及预后的评价。2,慢性丙型肝炎与自身免疫性肝炎相关的自身抗体慢性丙型肝炎的发病与免疫因素有关，且与很多免疫性疾病有关。慢性丙型肝炎患者血清中常出现自身抗体w勺，并且它的出现彩响ALT上升及肝细胞的损伤U1]2・1丙肝患者的自身免疫与自身抗体1990年Mishiro等U3］在慢性HCV感染的患者中发现了抗・GOR抗体。GOR是一种核抗原，由宿主细胞编码。由于HCV核壳蛋白与GOR肽链存在一部分同源序列，因此抗・GOR被认为是HCV感染所特看的自身抗体。杨道锋等［⑷应用免疫学方法，检测了57例丙型肝炎恵者，发现患者血清中存在抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）.抗线粒体抗体（AMA）.类风湿因子（RF）、抗甲状腺球蛋白抗体（抗・TG）、抗微粒体抗体（抗・TM）。高润平等a采用荧光抗体间接法（IFA）对39例慢性丙型肝炎患者血清进行自身抗体检测,结果发现ANA和抗SMA的检出率均髙于健康人。这种自身抗体所引起的自身免疫反应导致多种器官的损伤，诱导自身免疫反应。22丙肝患者自身抗体的检出率•在HCV感染的患者中，约有32.3%〜75%的患者血清中可检测一种以上的自身抗体其中，以ANA.SMA和RF的检出率最高。 在HCV感染的患者中，检测方法与种族不同，其结果也不同，ANA在12.3^-64%,SMA的检岀率为3.5〜74%n5,81,RF的检出率可达42.86%〜59・概"叩。23自身抗体与丙型肝炎病毒（HCV）的复制赵彩彦等3将HCV-RNA阳性患者，与其HCV-RNA转阴后的自身抗体检岀率作了比较，发现HCV-RNA阴转后，自身抗体的检出率降低,两者之间呈显著差异，揭示自身抗体的出现与HCV在体内的复制活跃有关『病毒被清除或抑制后，自身抗体可以逐渐减少。估计HCV是慢性丙型肝炎患者自身免疫反应的触发因子，可能是由于HCV导致免疫紊乱，致使B淋巴细胞产生自身抗体。近年通过对病毒蛋白单克隆抗.体的研究发现，病毒和宿主细胞蛋白之间特别是细胞支架蛋白之间存在交叉反应，这种现象称之为分子模拟，这或许是慢性丙肝自身抗体产生的另一原因。2・4自身抗体与患者年龄.性别和病史的关系杨道锋等在检测丙肝患者的6种自身抗体时，比较了年龄、性别对自身抗体检出率的影响，发现40岁以上年龄组ANA、RF检出率分别为13.0%和78.3%；40岁以下年龄组的ANA、RF的检出率分别为11.8%和47.1%,两组RF的检出率有显著性差异；男性患者ANA.RF阳性率分别为6.7%和60.0%,女性患者的阳性率分别为1&5%和59.3%,两者之间无显著性差异；因此认为与HCV感染有关■•丙性屏炎患者的自身抗体产生，与性别无关，但与患者的年龄有关。2.5自身抗体与血清免疫球蛋白余宏等m在抗HCV-IgM.抗HCV-IgG阳性患者自身抗体检测中发现■抗HC卜IgG、抗HCV-IgM均阳性的患者自身抗体检出率大于抗HCV-IgM阳性患者，认为丙型肝炎病史长者的自身抗体阳性率高于近期咸染者，丙型肝炎患者高于HCV感染后无症状者。这些结果也表明自身航体的出现,不仅与HCV感染有关,而且与HCV感染的严重程度、病程长短有关。 2.6自身抗体与干扰素国外已把干扰素（IFN）作为丙型肝炎的标准治疗用药,治疗后有效反应一般约50%,有效反应的判定标准多以血清HCV-RNA和丙氨啟氨基转移酶（ALT）水平为标准。仝文斌等"°】研究表明，慢性病毒悻肝炎患者（包括乙型肝炎和丙型肝炎）自身抗体与干扰素抗体的出现无相关性；自身抗体的是否出现与ALT的改善及病毒指标的恢复均无相关生.即自身抗体的存在与否和IFN的疗效无关。•回治疗慢性HCV感染有时诱尊左生自身抗体和自身免疫疾患,或使原已存在的免疫异常加重。Imagaw/J等对58名HCV感染患者进行研究，发现在IFN治疗过程中，32.8%的患者出现至少一种自身抗体，包括抗-TM、ANA.抗-SMA。其中2名患者出现甲状腺功能低下,■■■而19名未接受IFN治疗的患者，在相同的随访期内没有一例出现自身抗体或自身免疫疾病。提示，IFN是一种免疫调节因子，能诱导自身抗体和自身免疫疾患。么7虫身免疫性肝炎与丙型肝炎患者的自身抗体自身免疫性肝炎是与自身免疫反应密切相关的一种慢性肝病。此病以高丙种球蛋白血症、血清自身抗体阳性.组织学检査至少有汇管区炎症为特征.大多数病人对免疫抑制治疗有效也8。自身抗体阳■性的丙型肝炎患者，临床上多见血清ALT及一球蛋白升高何•存在明显的自身免疫现象。自身抗体的种类常与AIH时出现的自身抗*体相似，故有时与自身免疫性肝炎难以区别皿】・慢性丙型肝炎与自身免疫性肝炎不易鉴别的最主要原因是两者体内都可出现类型相似的自身抗体，但两者的遗传背景.在肝组织学和病毒学特征以及免疫调解剂治疗都存在着明显的差异。不适当地使用于扰素可能会使自身免疫性肝炎病情恶化，而盲目应用免疫抑制剂•有可能加重病毒血症，因此，正确区分自身免疫性肝炎和丙型肝炎合:并自身免疫现象则显得尤为重要。自身免疫性肝炎经激素治疗可以降•低死亡率，但慢性丙型肝炎用激素反而增加病毒复制，加重病情妙酬, 所以慢性丙型肝炎自身免疫现象与自身免疫性肝炎的鉴别对制定治■疗方案具有重要意义。丙型肝炎与自身免疫性肝炎的发病机制不同，丙在型肝炎，HCV可触发或作为一个致病因子引起体内自身免疫现象，产生自身抗体。目前有两个重要问题还待进一步深入研究，（1）丙型肝炎患者的自身抗体与真正的自身免疫疾病的区别。（2）IFN治疗HCV感染而出现的自身免疫现象，是IFN治疗触发,还是由HCV病毒自身引起切.■3慢性丙型肝炎患者血清中抗核抗体的水平慢性丙型肝炎患者血清中与自身免疫性肝炎相关的自身抗体（血A.SMA、抗抗・LC1）检出率较高，并存在许多其他自身至疫现象，也支持HCV感染为自身免疫性肝炎起因的假说，在略床上，20%的自身免疫性肝炎患者病程自限，还有部分患者治疗结束后发生不可预测的加重等表现，都与慢性丙型肝炎和似•有发现患者的配偶也会出现免疫学标志提示他们可能暴露壬h个共同的病毒或环境因素。Mackie报道患儿因抗al胰蛋白酶缺乏症行肝移植术时感染了HCV,HCV感染后继发出现抗・LKM・1阳性㈣叫作为HCV感染自身免疫性肝炎的最有力的证据。自1989年Esteban等首♦次在自身免疫性肝炎患者血清中检测出抗HCV以来，HCV感染与自身免疫的关系越来越引起人们的关注，很多研究提示血乂感染在机体自身免疫反应的发生机制中起一定作用。吴赤红㈤】等对69例慢性丙型肝炎患者进行ANA、SMA.AMA和LKM的检测，证实了慢性丙型肝炎患者体内存在多种自身抗体，HCV感染可诱导自身免疫反应，并慢性丙型肝炎中的检出率明显高于慢性乙型肝炎，说明丙型肝炎相对更易引起宿主自身免疫反应。检测中还发现自身抗体在低滴度时，是自身免疫现象反应标志，在高滴度时才与自身免疫性疾病密切相关。文献报道HCV感染机体后，可诱导机体产生自身抗体，且随着病情的加重，伴发自身免疫性肝炎的可能性增加。丙型肝炎患者血清中检出高滴度自身抗体时，应考虑其重叠自身免疫性肝炎的可能・因此，检测SMA>ANA.LKM抗体对鉴别诊断，确定主要疾病有决定意义。若 AIH占优势，SMA、ANA.KM滴度多为高滴度(>1：■320),患者伴有高丙球蛋白血症，肝穿病理示严重的小叶内炎症，汇管区大量浆细胞浸润，ALT和AST增高明显。总之慢性丙型肝炎存在自身免疫现象，与自身免疫性肝炎(尤其是AIH・2)存在某种关联，然而慢性丙型肝炎是由于HCV感染所诱■导自身免疫反应使患者血清出现多种自身抗体，检测其自身抗体对丙型肝炎患者的诊疗有一定的参考价值。参考文献[1]CliffordBD,DonahueD,SmithL,etal.prevalenceofserological・markersofautoimmunityinpatientswithchronichepatitisC[J]・•Hepatology,1995,21(3):613.［2］张玉洪，叶荻庆，陈瀑，等•丙型肝炎患者血清的自身抗体测定和临床分析［J］・中华国际医学杂志，2001,1(1)325-7.［3］•范列英，仲仁前，赵文静，等.慢性肝病和原发性肝癌患者血清抗核抗体检测及其临床意义［JJ.上海免疫学杂志，2000,20(2):120[4]KimSfLivaSM,DalalMA.Estriolamelioratesautoimmunedemyelinatingdisease:Implicaticmsformultiplesclerosis卩].・•Neurology,1999,52(6):1230[5]lCfiyakawaH,KitazawaE>KikuchiK,etal.ImmunoreactivitytoVariousHumanCytochromeP450ProteinsofSerafromPatientswithAutoimmuneHepatitis,ChronicHepatitisB,andChronicHepatitisC[J].Autoimmunity,2001,33:23•e••⑹ObennayerStranbP,MannsMP.HepatitisCandD,retrovimses 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