微生物的培养与分离一轮学案

《微生物的培养与分离一轮学案》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、微生物的分离和培养【考纲要求】微生物的分离和培养B【复习要求】1.理解培养基对微生物的选择利用并能利用选择培养基分离微生物2.掌握培养微生物的过程、条件和方法3.掌握测量微生物数量的方法、统计菌落数量的方法4.能利用选择培养基分离微生物的方法【基础知识】一、微生物的实验室培养1.培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（2）成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。营养要素来源功能碳源无机氮源C02、NaHC03、CaC03等含碳无机物①构成细胞中的物质和一些代谢产物；②既是碳源又是能源有机碳源

2、糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、钱盐、硝酸盐、血等将无机氮合成含氮的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白瞅核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应（3）分类和应用划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂T业牛产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分含化学成分不明确的天然物质丁业牛产培养基培养基成分明确（用化学成分已知的化学物质配成）分类、鉴定培养基用途培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物

3、的生长，促进所需要的微生物的牛长培养、分离出特定微生物（如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度）培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用添加的培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽）培养基2.无菌技术①消毒和灭菌的区别条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法牛奶等化学药剂、物理消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源；紫外线消毒灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽砲和胞子灼烧

4、灭菌法接种工具灭菌法玻璃器皿、金属工具灭菌法培养基及容器的灭菌②三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌接种环、接种针、涂布或其他金属工具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等干热灭菌箱内，°C〜°C1h〜2h高压蒸汽灭菌培养基等高压蒸汽灭菌锅内kPa,°C15min〜30min3.实验操作⑴牛肉膏蛋白腺固体培养基的制备计算〜称量〜熔化一灭菌T到平板。(2)微生物的分离方法：①划线法②平板法微生物的计数方法：方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项(1)接种环的灼烧：①第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物②每次划线前：杀死残

5、留菌种，保证每次划线菌种来自划线末端③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要后再进行操作，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后区域不要与第—区域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基。(1)稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应离火焰1〜2cm处(2)涂布平板时：①涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体目的在培养基上形成由

6、单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落培养平板冷凝后培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染。二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成豚酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。1.菌种筛选：使用是唯一氮源的培养基培养。2.统计菌落数目：常用方法有、显微镜直接计数法。①直接计数法：这种方法是利用血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌与活菌。(但用亚甲基蓝染色后，死细胞是蓝色，活的是无色的）①间接计数法（活菌计数法）：稀释涂布平板法,常用来统计样品中的活菌数

7、。此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的。1.实验流程：土壤取样一制备培养基〜微生物的培养与观察一细菌的计数。2.观察记录结果：每克土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均数X稀释倍数。思考：①如何进行系列稀释？②某稀释倍数指哪一个倍数？③计算值和真实值之间的关系？为什么？3.鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂变—，说明细菌能分解尿素。三、分