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《三疣梭子蟹Crustin抗菌肽原核表达载体构建【毕业论文】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本科毕业论文目录本科毕业论文（20届）三疣梭子蟹Crustin抗菌肽原核表达载体构建专业：生物科学本科毕业论文目录目录摘要IAbstractII引言11材料与方法31.1试剂与方法31.1.1材料31.1.2培养基及试剂31.1.3仪器31.1.4实验所用引物序列31.2方法41.2.1三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA的提取41.2.2目的基因的RT-PCR扩增41.2.3添加接头51.2.4扩增产物纯化61.2.5目的基因片段克隆载体的构建61.2.6pET-28a原核表达载体的构建72结果与分析112.1三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA
2、的提取112.2RT-PCR与接头连接112.3克隆载体的构建122.4表达载体的构建132.5本章小结143讨论15参考文献16致谢18本科毕业论文中文摘要摘要[摘要]Crustin最早由Relf等在青蟹Carcinusmaenas中分离鉴定，后续研究表明Crustin普遍存在于甲壳类中，甲壳类crustin以其C末端的WAP结构域为标志，也有8个保守的Cys残基，形成4对分子内二硫键。实验室已从三疣梭子蟹血淋巴细胞cDNA文库中克隆出两个crustin的异构体，通过原核表达载体构建研究crustin这两个异构体之间的活性和活性差
3、异。本实验以三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA为模板，EcruS1和EcruR1，Ecr3S1和Ecru3R1分别为I型Crustin和III型Crustin的上下引物，进行RT-PCR,再在上述引物中添加接头EcruS2和EcruR1，Ecru3S2和Ecru3R1进行PCR，成功扩增到预期长度一致的单一扩增带、以pEASY-Bluntsimplevector为克隆载体，成功构建目的基因片段克隆载体，目的基因克隆载体质粒与空白表达载体质粒pET-28a分别双酶切、割胶回收后，用T4DNAligase连接，转化E.coliDH5α后PCR
4、检测表明连接成功，以M13为引物测序显示重组载体中有His•Tag、thrombin酶切位点、T7•Tag、肠激酶酶切位点与成熟目的基因组成，表明重组表达载体构建成功。[关键词]三疣梭子蟹；Crustin；原核表达；表达载体16本科毕业论文英文摘要Abstract[Abstract]Thefirstrustinidentifiedwasan84aminoacidproteinisolatedfromhemocytesofthegreencrab（Relfetal,）,follow-upstudieshaveshownthatcrus
5、tincommonlyfoundincrustaceans,particularlyatitsC-terminus,whereeightcysteineresiduesformaWAPdomain.LaboratorybloodlymphocytesfromtrituberculatusclonedcDNAlibraryoftwoisomerscrustinbyprokaryoticexpressionvectorofcrustinbetweenthetwoisomersofactivityandactivitydifference
6、s.ThisstudytakesthetotalRNAofBlueCrab’sbloodlymphocyteasatemplate,EcruS1andEcruR1,Ecr3S1andEcru3R1respectivelyastheupstreamanddownstreamprimersofI-CrustinandIII-CrustinforRT-PCR,andthenintheaboveprimerstoaddjointsEcruS2andEcruR1,Ecru3S2andEcru3R1forPCR,successfullyampl
7、ifiedasingleamplificationastheexpectedlength.pEASY-Bluntsimplevectorasthecloningvector,thegenefragmentwassuccessfullyconstructedcloningvectorwasclonedwiththeblankexpressionvectorplasmidpET-28aplasmiddoubledigestion,respectively,tappingrecovered,withT4DNAligaseligation,
8、transformationE.coliDH5αPCRanalysisshowedthatafterasuccessfulconnection,theM13sequencingprimerintherecombinantvectoro
