三疣梭子蟹hyastatin抗菌肽原核表达的构建【毕业论文】

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1、本科毕业论文目录本科毕业论文（20届）三疣梭子蟹hyastatin抗菌肽原核表达的构建专业：生物科学本科毕业论文目录目录摘要IAbstractII引言11材料与方法21.1实验材料、试剂与仪器设备21.1.1实验材料预处理21.1.2实验仪器设备21.1.3实验试剂21.1.4引物31.2方法31.2.1三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA的提取31.2.2目的基因RT-PCR扩增31.2.3添加接头41.2.4扩增产物纯化51.2.5目的基因片段克隆载体的构建51.2.6pET-28a原核表达载体的构建62实验结果与分析92.1三疣梭子蟹血淋巴细胞总RNA的提取92.2目的基因扩增92.3克隆载体的

2、构建102.4表达载体的构建102.5本章小结123讨论133.1目前常用的抗菌肽重组表达技术133.2抗菌肽在大肠杆菌中表达的影响因素和优化策略13参考文献15致谢17本科毕业论文中文摘要摘要[摘要]抗菌肽Hyastatin是Sperstad等[4]2009年首次在蛛形互爱蟹(Hyasaraneus)血细胞中纯化鉴定的一种对G+/G-菌、真菌均有抑制活性的新型抗菌肽，其C端结构域与对虾抗菌肽Penaeidins同源，也有6个保守的Cys残基，形成3对分子内二硫键，因此Hyastatin属于Penaeidins家族抗菌肽。本实验室在前期的研究中从三疣梭子蟹(Portunustritubercu

3、latus)血细胞中也克隆到了一个与蛛形互爱蟹Hyastatin同源、但结构存在显著差异的新型Hyastatin(命名为Pthyastatin)抗菌肽全长cDNA序列，为研究Pthyastatin的理化性质与生物学功能，本研究采用Trizol法提取三疣梭子蟹血细胞总RNA，RT-PCR扩增目的基因，以pET28a为表达载体、大肠杆菌Transetta和BL21两菌株为宿主细胞，采用原核表达体系表达重组抗菌肽rPthyastatin。研究结果表明：三疣梭子蟹总RNA的抽提、目的基因片段的RT-PCR扩增、克隆载体的构建、pET28a－rHyastatin表达载体的构建等研究均获得成功。本研究为抗

4、菌肽Pthyastatin的重组表达及抗菌肽Pthyastatin后续的理化性质及生物学功能研究奠定了良好的基础。[关键词]三疣梭子蟹；抗菌肽；Pthyastatin；原核表达14本科毕业论文英文摘要Abstract[Abstract]：SperstadandotherantimicrobialpeptidesHyastatinisthefirsttimein2009,HyasaraneusinthebloodcellsofapurifiedandidentifiedontheG+/G-bacteria,fungihavetheinhibitoryactivityofnewantimicrob

5、ialpeptide,theC-terminaldomainandhomologouspeptidePenaeidinsshrimp,therearesixconservedCysresidues,formingthreepairsofintramoleculardisulfidebonds,soHyastatinfamilyofantimicrobialpeptidesarePenaeidins.InthepreviousstudyinourlaboratoryfromPortunustrituberculatusinthebloodcellsareclonedtoformamutuallo

6、vewiththespidercrabHyastatinorigin,buttherearesignificantdifferencesinthestructureofnewHyastatin(Pthyastatin)full-lengthcDNAantimicrobialpeptidesequenceforthestudyofPthyastatinphysicalandchemicalpropertiesandbiologicalfunctions,thisstudyextractedusingTrizolportunusbloodcelltotalRNA,RT-PCRamplificati

7、onofthetargetgenetotheexpressionvectorpET28a,EscherichiacoliBL21Transettaandtwostrainsofhostcells,theuseofrecombinantprokaryoticexpressionsystemofantimicrobialpeptidesrPthyastatin.Theresultsshowthat:t