厌氧微生物的分离及培养

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1、厌氧微生物的分离及培养一、目的要求1、掌握碱性焦性没食子酸法的原理；2、掌握斜面接种法和大试管套小试管法进行厌氧微生物培养的方法。二、基本原理厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，作用也日益引起重视。培养厌氧微生物的技术关键是要使该类微生物处于除去了氧或氧化还原势低的环境中。用于严格厌氧菌的分离和培养①Ｈungate技术；②厌氧手套箱；一般厌氧菌的培养①碱性焦性没食子酸法②厌氧罐培养法③疱肉培养基法碱性焦性没食子酸法焦性没食子酸与碱溶液（NaOH、Na2CO3和NaHCO3）作用后形成易被氧化的碱性没食子酸盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子橙从而除掉密封容器

2、中的氧。这种方法的优点是无需特殊及昂贵的设备，操作简单，适于任何可密封的容器，可迅速建立厌氧环境。而其缺点是在氧化过程中会产生少量的一氧化碳，对某些厌氧菌的生长有抑制作用。同时，NaOH的存在会吸收掉密封容器中的二氧化碳，对某些厌氧菌的生长不利。用NaHCO3代替NaOH，可部分克服二氧化碳的被吸收问题，但却又会导致吸氧速率的减慢。厌氧罐培养法利用一定方法在密闭的厌氧罐中生成一定量的氢气，而经过处理的钯或铂可作为催化剂催化氢与氧化合成水，从而除掉罐中的氧而造成厌氧环境。例如：利用镁与氯化锌遇水后发生反应生成氢气，及碳酸氢钠加柠檬酸水后产生CO2，而厌氧罐中使用的厌氧度

3、指示剂一般都是根据美蓝在氧化态时呈蓝色，而在还原态时呈无色的原理设计的。疱肉培养基法碱性焦性没食子酸法和厌氧罐培养法都主要用于厌氧菌的斜面及平板等固体培养，而疱肉培养基法则在对厌氧菌进行液体培养时最常采用。其基本原理是，将精瘦牛肉或猪肉经处理后配成疱肉培养基，其中既含有易被氧化的不饱和脂肪酸能吸收氧，又含有谷胱甘肽等还原性物质可形成负氧化还原电势差，再加上将培养基煮沸驱氧及用液体石蜡凡士林封闭液面，可用于培养厌氧菌。这种方法是保藏厌氧菌，特别是厌氧的芽胞菌的一种简单可行的方法。若操作适宜，严格的厌氧菌都可获得生长。三、实验器材1、样品（自带）2、培养基：肉膏蛋白胨琼脂

4、培养基斜面（根据实验室提供的对照菌的培养要求，可能还有其他培养基）。3、溶液和试剂：10％NaOH，焦性没食子酸等。4、仪器和其他用品：棉花，无菌的带橡皮塞的大试管，滴管、接种环等。六、思考题１、在进行厌氧菌培养时，为什么每次都应同时接种一种严格好氧菌作为对照？