细菌的接种及分离培养

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1、实验6细菌培养法一、目的要求1、掌握细菌的一般培养法；2、掌握细菌培养的接种方法，进一步熟悉无菌操作技术。二、实验材料菌种：葡萄球菌培养物、大肠杆菌培养物、枯草杆菌培养物、变形杆菌培养物；实验器材：接种环、接种针、酒精灯；培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基；细菌接种的要求无菌操作细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌标本的采集无菌试管、烧瓶的使用常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。图－6接种工具细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标

2、本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境三、细菌的接种法（二）细菌的琼脂平板分离划线接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；培养基：固体平板培养基；用途：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。细菌的分离—平板划线法1.分区划线法：2.连续划线法：1.分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环2.连续划线法（三）细菌的纯种接种法当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。

3、一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。琼脂斜面接种法液体接种法半固体接种法1、琼脂斜面接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；培养基：斜面固体培养基；用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。琼脂斜面培养基接种法2、液体接种法菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物；培养基：液体培养基；接种方法：液体接种法。从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入液体培养液；用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。3、半固体穿种接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；培养基

4、：半固体培养基接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。四、细菌培养法一般培养（需氧培养）：★培养温度：35℃（采用恒温培养箱）★培养时间：18～24h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在固体培养基中的生长现象菌落：定义：指单个细菌在平板培养基上37℃18-24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（

5、R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落与菌苔菌落（S型）菌苔菌落（R型）菌落的形态特征有助于细菌的鉴别细菌在液体培养基中的生长现象混浊：大多数细菌沉淀：多见于链状排列的细菌菌膜：多见于需氧菌细菌在半固体培养基中的生长现象有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。