一例山羊新孢子虫病的临床观察及病原分离和鉴定

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1、分类号８５２．７１单位代码：１０１８３：Ｓ研究生学号１６８５４０２０：：２０密级公开＿吉林大学硕士学位论文专业学位（）一例山羊新孢子虫病的临床观察及病原分离和鉴定Ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｔｈｏｅｎｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ，ｐｇａｃａｓｅｏｆａＮｅｏｓｐｏｒｏｓｉｓｏｆｇｏａｔ作者姓名：王雅楠：类别．兽医硕士领域（方向）：兽医指导教师：杨正涛教授培养单位：动物医学学院２０１８年６

2、月一例山羊新孢子虫病的临床观察及病原分离和鉴定Theclinicalobservation,pathogenisolationandidentificationofacaseofaNeosporosisofgoat作者姓名：王雅楠领域（方向）：兽医指导教师：杨正涛教授类别：兽医硕士答辩日期：2018年6月4日本研究由国家重点基础研究发展计划（2015CB150306）资助。Projectsupportwasprovidedbythe“NationalKeyBasicResearchProgram(973p

3、rogram)ofChina”(GrantNo.2015CB150306).未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人

4、或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期丨：＞尽年厶月＾丨中文摘要一例山羊新孢子虫病的临床观察及病原分离和鉴定2016年，本实验室在进行“宿主胞外诱捕网抗新孢子虫感染”的课题研究过程中，在松原地区购买了9只成年山羊作为分离中性粒细胞的供血动物，其中一只山羊外周血中分离得到的中性粒细胞，在光学显微镜下观察到疑似半月牙形结构，但当时并未引起足够重视，在随后进行的实验中，送

5、样品进行扫描电镜观察胞外诱捕网时，在没有新孢子虫刺激的中性粒细胞空白组，同样观察到半月牙状结构,该结构与顶器门原虫当中的弓形虫、新孢子虫镜下形态一致，在反复核查排除了因操作失误而人为污染空白样本的可能性后，转而怀疑作为供血动物的山羊是不是已经遭受了污染，因而我们直接采集该山羊外周血进行巢式PCR来验证我们推测的几种类似结构的寄生虫，初步结果证实该山羊感染的病原为犬新孢子虫。新孢子虫病是由犬新孢子虫寄生于宿主细胞所引起的一种多种动物共患的原虫病，主要引起母畜的繁殖障碍和幼畜的运动神经症状等。犬新孢子虫可感染多种

6、宿主，包括羊、牛等中间宿主及犬、红狐等终末宿主。近年来，众多新孢子虫的流行病学调查结果显示，我国青海和新疆地区的绒山羊及内蒙古地区的绵羊和山羊新孢子虫的感染率较高，且已成为造成怀孕母羊繁殖障碍的主要因素之一，新孢子虫病对养羊业的威胁已不容忽视，然而成年山羊感染新孢子虫而发病的病例鲜有报道。此外，目前尚无针对新孢子虫的有效疫苗和特效药物，这给新孢子虫病的防控造成了困难。因此，研究羊新孢子虫病的临床症状、病理变化、流行情况以及通过获得病原进行新孢子虫疫苗研发、建立诊断方法及研究治疗药物已成为新孢子虫病研究的必要环

7、节。本研究以上述疑似感染新孢子虫的山羊为基础，主要实验内容分以下3个部分：（1）采集感染山羊的血液提取基因组进行巢式PCR鉴定，结果表明该病羊感染的病原微生物是犬新孢子虫。之后对感染山羊进行临床观察，发现该病羊呈现被毛凌乱、消瘦、食欲不佳、神经症状等。病理剖解可见大量心包积液I等病变。病理组织学变化显示脑组织水肿、神经元变性及多器官的炎症反应等病理变化。（2）采集感染山羊的外周血并分离白细胞，将分离物接种于vero细胞进行培养、传代，在光学显微镜下呈现的纳虫空泡及速殖子与犬新孢子虫的典型培养形态完全一致，同时

8、用扫描电镜观察分离物的结果与典型的犬新孢子虫速殖子形态一致，之后用巢式PCR方法鉴定分离物DNA，以上试验结果证实本研究中分离培养的病原是新孢子虫。（3）采用巢式PCR方法对松原地区4个山羊养殖场进行新孢子虫感染情况的初步调查，检测的83份样品中可观察到9份阳性样品，阳性率为10.84%。综上，本研究证实了吉林地区的羊群中存在自然感染新孢子虫的成年山羊，对其临床症状及病理组织学变化进行了观察，并且成