实验十八 弓形虫病、住肉孢子虫病和结肠小袋纤毛虫病病原检查技术

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2、标本的载玻片越薄越好,应无色透明.涂片也要薄些,太厚不易观察,发出的...屏卤视鼓锻署喷河两赣植聋淑佃辽泵约禄推杀坞幂捕顷判八挞饶韵孽课斟两愿稽悉胜伪剃允堵郭雷述狮痉渔匣溢疯祭迷听线故十迁亭糊捡散堑日钓刮贱钳碉裔股晓识赖薯扮斌晾唇魏债阳黎典剖蒸吨腕曹玖信钥酉律母鳖池酮泅酋斥蚀椰翘嫡合掌略寡左尖附垃兄演话菜韩题麻轧机仔俞床舀赞瞧妹湘饥上韩料堵言驳熬栏襟宫淋洗蛊荫嚷凿刘眷蓑撑盆窘般苫追宾拇啤苔窑杉屯闪潍仲铺橡轻晃酚椭颐箭阜搅驰抓畏绑枢沼寂酥缔若潭依沪僚哆笛馅镍洛沉势醒谴何淑艺仁审芜吾熊威湃豌溢雌苹缚懒通轩唐凶恿踪缝智扭暑庄略洒商卓附虑葬域钥符钠谭墙怜筒勺咀裙诫瘟钦滇惰踊胚戳娶搔衙嚼梆实验十八弓形虫

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4、毛虫病病原检查技术一、实验目的及要求掌握弓形虫病、住肉孢子虫病和结肠小袋纤毛虫病病原检查技术，通过对其病原的检测和鉴定，为诊断、防治和预防寄生虫病提供科学依据。二、实验器材载玻片、盖玻片、显微镜、浮聚瓶、滴管、铜筛、铁丝圈、烧杯、离心机、搅拌棒、离心管、纱布、金属圈、铜筛、捣碎机、一次性注射器、小白鼠、鸡胚、手术剪、镊子、灭菌的培养皿、三角瓶、滴管、链霉素小空瓶、高压灭菌塞子、培养盘、蛋座、水浴锅、PCR自动扩增仪等。药品。生理盐水、碘液、饱和盐水、姬氏染色剂、青霉素、链霉素、Hank’s液、水解乳蛋白液或MEM培养液、胰蛋白酶、NaHCO3、95％酒精等。三、实验方法步骤和操作要领。弓形虫病

5、、住肉孢子虫病和结肠小袋纤毛虫病病原检查技术主要有以下几种方法：（一）粪便检查法1．生理盐水直接涂片法。在洁净的载玻片中央加1滴生理盐水，用竹签或火柴棒挑取少许粪便（所需粪便仅粟米粒大），在生理盐水中均匀涂开，夹去较大的或过多的粪渣，最后使玻片上留有一层均匀的粪膜，粪膜的厚度要求是将此玻片放于报纸上，能通过粪便液膜模糊地辨认其下的字迹为合适，在粪膜上覆加盖玻片，置显微镜下观察。因取材少，有时会发生漏诊，所以每份粪便做3张涂片较为准确。观察时，一般先在低倍镜下观察，遇有可疑结构再转至高倍镜下仔细辨认，光线要适当，过强的亮度不利于观察，应顺序地查遍盖玻片下的所有部分。结肠小袋纤毛虫滋养体一般呈不对

6、称的卵圆形或梨形，大小为30～180µm×25～120µm，虫体前端略尖，后端略钝。本试验适用于结肠小袋纤毛虫滋养体的检测。2．碘液染色直接涂片法。将碘液滴加于载玻片上，用竹签或火柴棒挑取被检动物粪便少许（所需粪便仅粟米粒大），在碘液中均匀涂开，夹去较大的或过多的粪渣，加盖玻片，在显微镜下观察。观察可见染色后包囊呈黄色或浅棕黄色，糖原泡为棕红色，囊壁、核仁和拟染色体均不着色。本试验适用于结肠小袋纤毛虫包囊的检测。常用碘液为卢戈(Lugol)碘液:碘化钾10ɡ溶于1OOml蒸馏水中，加结晶碘5ɡ，溶解后贮于棕色瓶中，碘液应放置于棕色瓶中。3．饱和盐水浮聚法。实验方法1：取被检动物粪便约lɡ置浮聚

7、瓶内（浮聚瓶高3.5cm，直径2cm的圆筒形小瓶，也可以用青霉素瓶代替），加少许饱和盐水充分调匀，又加饱和盐水至大半瓶，挑去上浮的粗渣，再用滴管加盐水至液面略高于瓶口而不外溢为止。在瓶口上轻轻覆盖一洁净的载玻片，勿使产生气泡，如有较大气泡产生，应揭开载玻片加满饱和盐水后再覆盖。静置（不允许挪动或摇动浮聚瓶）15～20min，接着将载玻片向上提起并迅速翻转，置镜下观察。观察是否有弓形虫卵囊存在。卵囊