生化设计性实验

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1、影响酶活性的因素生化一组4小组：叶蓁、闵泽楚、赵泽楠、袁野一、实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察不同底物、温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。二、原理1、影响酶活性的因素包括：底物类型、酶浓度、底物浓度、产物浓度、抑制剂、激活剂、pH值、温度等2、淀粉在淀粉酶的作用下被降解成单糖，这种降解过程是逐步进行的，降解的中间产物遇碘曾现不同的颜色：3、淀粉→红色糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖（紫蓝色）（红色）（无色）所以根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否已完全。三、试剂和器材1.试

2、剂新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、1%淀粉溶液、0.1％氯化钠溶液、0.1％硫酸铜溶液2.器材恒温水浴锅、冰箱、电磁炉四、实验步骤依据实验原理而定实验一：酶对底物的特异性一、实验目的：了解酶的特异性并掌握检查酶的特异性的方法和原理。二、实验原理：酶的特异性是指一种酶只能对一种或一类化合物（此类化合物通常具有相同的化学键）起作用，而不能对别的化合物起作用。如淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。本实验以唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麦芽糖酶）对淀粉的作用为例，说明酶的特异性。淀粉和蔗糖都没有

3、还原性，但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖，均为还原性糖，能与Benedict试剂反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。三、试剂和器材1.试剂新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、1%淀粉溶液2.器材试管、控温水浴锅四、操作方法1.检查试剂取2只试管，按下表操作。试管编号试剂处理121%淀粉溶液/mL3－1%蔗糖溶液/mL—3Benedict试剂/mL22沸水浴煮沸2～3min记录观察结果淀粉酶的专一性实验取2只试管，按下表操作。试管编号试剂处理12稀释的唾液/mL111%淀粉溶液/mL3－

4、1%蔗糖溶液/mL—3摇匀，置37℃水浴保温10minBenedict试剂/mL22沸水浴煮沸2～3min记录观察结果实验二：温度对酶活性的影响一、实验目的：1．初步学会探索温度对酶活性的影响的方法。2．探索淀粉酶在不同温度下催化淀粉水解的情况。二、实验原理：1．淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。2．淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过程中，不同阶段的中间产物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。）3．酶的活性受温度的双重影响。在一定温度范围内，酶活性随温度上升而增高。温度每升高10℃，反应速度增加一倍左右；

5、但是，温度过高会使酶蛋白质变性，致使酶活性降低或完全丧失。当酶促反应速度达到最大值时的温度，称为酶作用的最适温度。三、试剂和器材1.试剂1%淀粉溶液、稀释唾液、碘液2.器材试管、控温水浴锅四、实验步骤：按照下表进行实验序号加入试剂或处理方法试管ABCabc11%淀粉溶液2mL2mL2mL///新鲜唾液///1mL1mL1mL2保温5min60℃100℃00C600C1000C00C3将a液加入到A试管，b液加入到B试管，c液加入到C试管中，摇匀4保温5min600C1000C00C5滴入碘液，摇匀2滴2滴2滴6观察

6、现象并记录实验三：pH对酶活性的影响一、实验目的：1．初步学会探索pH对酶活性的影响的方法。2．探索淀粉酶在不同pH下催化淀粉水解的情况。二、实验原理：1．淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。2．淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过程中，不同阶段的中间产物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。）3．酶的活性受环境pH的影响极为显著。因pH影响酶蛋白和底物的解离状态，从而明显改变酶与底物的结合和催化作用。每一种酶发挥作用的最佳条件要求最适pH，此时酶的活性最大。当其他条件相同时，离最适pH越近，其活性越大，所催化

7、的反应速率也最快。三、试剂和器材1.试剂1%淀粉溶液、生理盐水、稀释唾液、班氏试剂、碘液、0.1mol/LpH5~8磷酸盐缓冲液（配制见实验课本207页）2.器材试管、控温水浴锅、吸量管、滴管四、实验步骤：按照下表进行实验序号加入试剂或处理方法试管1231稀释唾液1mL1mL1mL2注入pH为5的磷酸盐溶液1mL//3注入pH为6.8的磷酸盐溶液/1mL/4注入pH为8的磷酸盐溶液//1mL51%淀粉溶液2mL2mL2mL6370C水浴保温5min7加入班氏试剂，边加边振荡2mL2mL2mL8水浴加热煮沸1min9

8、观察3支试管中溶液颜色变化变记录