生化实验期末课程设计

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1、教师签名宁波理工学院生化卖殓课程设计题目茶叶蛋白质含量的测定姓名黄舟舸学号3110519027学院生物与化学工程学院专业班级制药111一、实验目的:1、测定茶叶中的蛋口质。2、探究PH对提取率的影响。3、探究温度对提取率的影响。4、探究捉取时间对捉取率的影响。二、实验原理：蛋白质是生物最重要的基木组成成分之一，是与营养、免疫、新陈代谢、生命的起源和进化等都息息相关的。由于蛋口质在体液中的含量可作为人体营养健康、疾病诊断的重要指标，因此蛋白质的定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占有十分重要的地位。茶叶蛋白

2、质由于主耍为谷蛋白等难以直接被人体消化吸收的蛋白质，因此研究开发茶蛋S的工作尤其是工业化生产茶蛋S的工作进展很慢。但是茶蛋白屮氨基酸组成是丰富合理的，含有16〜18种氨基酸，且必需氨基酸是齐全的。因此，将茶蛋口提取纯化后适当改性，可以变为消化吸收性较好的食用、饲用蛋白资源，茯至加工成食用乳化剂、起泡剂和胶凝剂等产品。本实验以制取茶多酚Z后的茶渣为原料,通过优化提取条件用PH3.0,NaCl浓度0.20mol/L的水溶液,料液比1：5于25°C下搅拌提取,离心、过滤后用紫外吸收法测定产胡屮的蛋白质含量。蛋白质溶

3、液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋口质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或捉取过程屮杂冇的核酸对测定结果引起极大误差，莫最大吸收在260nmo所以同时测定28()及26()mn两种波长的吸光度，通过计算可得较为正确的蛋白质含量。三、实验器材1、仪器设备数字计流仪、台式离心机、自动部分收集器、色谱柱、精密PH计、组织捣碎机、电动搅拌器、水循环真空泵、紫外分光光度计、温度控制器等。2、试剂耗材生产茶多酚后的茶渣、酒右酸亚铁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、盐酸、硫酸二胺等

4、(试剂药品均为分析纯)。实验步骤1、茶叶蛋白质的提取称取一定量的茶渣，浸泡0.5h,用中性水加热冋流提取3次,提取液4层纱布滤过，滤液离心(2000r/min,20min),取上清液并定容至500ml,即得样品液Weo用HCL和NaOH配制五份PH=2.0、4.0、6.0、8.0、10.0的水溶液。用组织捣碎机破碎细胞。搅拌溶液。取三份100ml样品液We.标记为A、B、C组。将A组溶液等分成五份,分别加入PH=2.0、4.0、6.0、8.0.10.0的水溶液,加入0.20mol/LNaCl,在20°C环境下

5、搅拌捉取30mino将B组溶液等分成五份，在10、20、30、40、50°C,PH=3.0环境下，加入0.20mol/LNaCl,搅拌捉取30min。将C组溶液等分成五份,在20°C,PH=3.0环境下，加入0.20mol/LNaCl,分别搅拌5、15、25、35、45min,捉取。2、蛋白质含量的测定将提取液离心、过滤，得到滤液。用紫外分光光度计测定蛋口质的含量。蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。五、实验结果计算:蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45

6、A28O-O.74A26o)xKA组:PH2.04.06.08.010.0提取率％3533303438B组:温度。C1020304050捉取率％3035363536.5温度对提取率的影响C组:搅拌时间min515253545提取率％1530373939六、实验注意事项：提取时间对提取率的影响紫外分光光度法测蛋白质操作简便、样品溶液可冋收，同吋可估计核酸含量。但核酸含量小于20%或溶液混浊、则测定结果误差较大。在使用上表和公式计算时也应注意各种蛋白质和各种核酸在280nm及260nm处的光吸收值也不尽相同，故计

7、算结果有一定误差。另外，由于需要配制的溶液较多，对溶液的称取、配制操作要求较高，在提取时也要保证搅拌完全。所配制的溶液要及时编号，以免弄混。实验吋注意安全。