本科生设计性实验生化——蚕豆病

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1、2012年设计性实验2012级临床五大班实验室二星期三上午组别：一组资料收集：杨汝平(201201235)陈浩楠(201201236)邱翼(201201238)PPT制作：罗文元(201201234)王兴(201201239)张晓东(201201240)汇报：向德航(201201237)案例患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促

2、，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5µmol/L，结合胆红素13.7µmol/L，未结合胆红素71.8µmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。（尿三胆）尿胆素（+）、尿胆红素(－)、尿胆素原(+)肝肠循环增多胆红素单核吞噬系统降解血红素红细胞破裂血红蛋白渗出尿蛋白(++)(1.0g/l)运氧功能障碍溶血性贫

3、血循环血量减少血压下降脉搏加快(心率加快)呼吸加快过多>34.2umol/L时，黄疸①血清总胆红素↑②结合胆红素变化不大（水溶性大，随尿排出）③未结合胆红素↑（水溶性小，不能随尿排出，有毒）酱油尿理论依据溶血性黄疸:由于红细胞的大量破坏，使胆红素产生过多，超过了肝细胞摄取结合的能力，使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多。葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏，输血不当均会引起病症蚕豆病：葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏。患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血。典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸，恶心呕吐，尿液呈酱油样等症状初步判

4、断是何种病？诱因：一天前食用蚕豆既往史：姐姐也曾出现过此症状蚕豆病（6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症）蚕豆病发病机制食用蚕豆产生大量过氧化氢，不被清除红细胞膜脂质被氧化破坏急性血管内溶血，产生过多胆红素导致溶血性黄疸，恶心，呕吐，尿液呈酱油样6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏使磷酸戊糖途径受阻。NADPH+H+缺乏致血还原型谷胱甘肽生成不足。红细胞被破坏，则可被肝等单核吞噬细胞识别并吞噬，释放血红蛋白，进一步分解为珠蛋白和血红素，而血红素被吞噬细胞降解为胆红素。胆红素是人体内原型抗氧化剂，能够清楚超氧化剂和过氧化物自由基，因患儿体内有大量过氧化

5、氢，氧化应激可诱导HO-1的表达，从而增加胆红素的量升高来抵御氧化应激状态。患儿正常（儿童）红细胞1.98×1012/L4.0*1012～5.3*1012/L血红蛋白53g/L120～140g/L血清总胆红素85.5µmol/L1.71～17.1μmol/L结合胆红素13.7µmol/L0～3.42μmol/L未结合胆红素71.8µmol/L0～13.68μmol/L尿蛋白(++)潜血(+)尿胆红素(-)尿胆素原(+)从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果主要临床表现：1.血尿、排酱油色尿、面色苍白2.皮肤及巩膜黄染3.体

6、温升高4.呼吸急促1.血尿、排酱油色尿、面色苍白G6PD↓GSH的主要作用：①保护红细胞内的含硫氢基（-SH）血红蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性，免遭氧化②与谷胱甘肽过氧化酶共同使H2O2还原成H2O→NADPH+H+↓→红细胞的抗氧化能力↓→GSH↓→红细胞膜破裂→溶血性贫血（面色苍白）→游离Hb>肾吸收阈值→血红蛋白尿/含铁血黄素尿2.皮肤及巩膜黄染3.体温升高机理：红细胞破裂↓血红蛋白暴露↓免疫系统攻击（单核-吞噬细胞系统）↓体温升高4.呼吸急促溶血性贫血↓具有载O2能力的Hb含量下降↓机体缺O2↓呼吸急促实验设计高铁血红蛋

7、白还原法实验思路患者姐姐出现过此类状况推测属于家族性遗传，且患者在食用蚕豆后出现症状，故即有可能为蚕豆病。6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的还原，故可以依据如下反应机制设计实验。亚铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红蛋白还原酶NADPH(辅酶)亚甲蓝(递氢体)亚硝酸钠实验反应方向一、实验目的1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法3、了解蚕豆病的发病机制及原因二、实验原理在全血中加入亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（MHb）,高铁血

8、红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中，高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体，还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以，G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降（分光光度技术）。三、实验器材及试