欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:40711558
大小:325.00 KB
页数:5页
时间:2019-08-06
《shRNA沉默IRS_1基因对鼠前脂肪细胞分化和PPAR_表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、·596·检验医学2010年8月第25卷第8期LaboratoryMedicine,August2010,Vol25.No8.文章编号:1673-8640(2010)08-0596-05中图分类号:R446.1文献标识码:AshRNA沉默IRS-1基因对鼠前脂肪细胞分化和PPARγ表达的影响112唐玲丽,唐爱国,周后德(1.中南大学湘雅二医院检验科,湖南长沙410011;2.中南大学湘雅二医院内分泌研究所,湖南长沙410011)摘要:目的观察胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因表达受阻对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化和脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响。方法针对小鼠IRS
2、-1基因开放阅读框上的2个区域合成短发夹核糖核酸[shRNA(M和MH)],以pGenesil-1vector为载体构建带绿色荧光蛋白(GFP)靶标的shRNA质粒。以TM脂质体Lipofectamin2000介导转染3T3-L1前脂肪细胞,并设阴性对照(HK)载体转染组。细胞转染后,G418筛-6选稳定表达的阳性克隆并通过免疫印迹法鉴定。应用0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10mol/L地塞米松(DEX)和5μg/mL胰岛素(Ins)分别诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞空白对照组、HK载体转染组、M和MH转染组分化,在诱导分化的不同时间点收集细胞。用免疫印迹法检测PP
3、ARγ的表达。脂肪细胞内脂滴用油红O染色观察。结果与空白对照组、HK组和转染M组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞相比,转染MH组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞IRS-1蛋白表达水平降低70%以上;而MH转染组细胞PPARγ蛋白的表达与前3组3T3-L1前脂肪细胞比较无改变。前3组3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞成功,PPARγ蛋白的表达在脂肪细胞分化成熟过程中逐渐增高。油红O染色显示,随着脂肪细胞的分化成熟,桔红色脂滴逐渐增多;而转染MH组IRS-1shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞经诱导,油红O染色桔红色脂滴显着减少,直到分化的第8天,才见少
4、许桔红色脂滴,且PPARγ蛋白的表达无变化。结论IRS-1基因沉默后可抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,并在分化过程中抑制PPARγ的表达,说明IRS-1通过调节PPARγ的表达或与PPARγ共同作用在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥决定性作用。关键词:胰岛素受体底物-1;脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ;RNA干扰;3T3-L1前脂肪细胞TheinfluenceofshRNAsilencingIRS-1geneonthedifferentiationofmousepreadipocytesandPPARγ112expressionTANGLingli,TANGAiguo,ZHOUHoude
5、.(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,HunanChangsha410011,China;2.InstituteofMetabolismandEndocrinology,theSecondXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,HunanChangsha410011,China)Abstract:ObjectiveToobservetheinfluenceofinsulinreceptorsubstrate-1(IRS-1)g
6、enesilencingonthedifferentiationofmouse3T3-L1preadipocytesandperoxisomeproliferator-activatedreceptorγ(PPARγ)expression.MethodsTwoshorthairpinRNA(shRNAMandshRNAMH)targettoIRS-1genecodingregionweredesignedandclonedintopGenesil-1-shRNAvectorwithgreenfluorescenceprotein(GFP)tag.ThepGenesil-1-IRS-1-shRN
7、ATMplasmidswerestablytransfectedinto3T3-L1preadipocytesbyLipofectamin2000,andnegativecontroltransfectedgroup(HK)wasset.ThepositivecloneswerescreenedbyG418andidentifiedthroughmeasuringIRS-1proteinby-6W
此文档下载收益归作者所有