组织制片技术概述1

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1、组织制片技术组织制片技术的概述组织制片技术的方法组织制片技术的基本程序苏木精—伊红染色组织制片技术的发展史从16世纪60年代Hook发明显微镜，开始观察和描述软木塞中的细胞至今，组织制片技术随着生命科学的发展而不断进步。组织制片技术的发展史在19世纪中期，随着生物、物理和化学等学科的飞速发展，以及显微镜和切片机的逐步完善，组织学也建立起一整套完整科学的组织制片技术。组织制片技术的发展史特别是20世纪50年代以来，由于组织化学、免疫组织化学等新技术和新仪器的出现，使组织制片技术的应用领域进入了一个崭

2、新的时期。利用组织制片技术的方法所制出的标本，显示了组织细胞的结构和形态、组织细胞之间的相互连接及组织细胞中的某些化学成分的种类和含量。提供最直观的依据。组织制片是研究医学和生物学的一个最基本的手段。组织制片的意义和目的组织制片技术的方法非组织切片法组织切片法非组织切片法组织不经过切片制成观察标本的方法。非组织切片法的种类涂片、压片、铺片、磨片、消化分离标本、活体标本、整装标本、血管注射标本。涂片将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂抹于载玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规HE染色。压片先将组织处理成小块物

3、质，然后用化学药品进行软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上。例如运动终板和寄生虫标本等。铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。磨片：对于骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上。消化分离标本：先将组织分离成小块，然后利用相应的化学物质将细胞间质消化溶解，再用机械分离的方法，如水的震荡冲击力，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻

4、片上进行封固。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。活体标本将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察。整装标本①将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中。②将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。血管注射标本①将有色物质注射进血管，用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。②将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。组织切片法利用化学试剂将组织经过一系列的固定、脱水

5、、透明后，再利用石蜡、火棉胶或者明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋成块，然后依靠切片机将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。组织切片法的种类冰冻切片石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片冰冻切片将所取材的新鲜组织，经快速冷冻后再切片，以保持组织内所含的脂类或某些酶类的活性。为观察急待结果的组织，如临床手术所取组织，也可用这种方法。组织切片标本制作的基本程序:1.取材→2.固定和固定后处理→3.脱水→4.透明→5.浸蜡与包埋→6.切

6、片→7.染色→8.封固取材一、动物的处死手法迅速、快捷。常用方法：1.麻醉法：吸入麻醉（乙醚）和注射麻醉（乌拉坦或者戊巴比妥）。2.空气栓塞法：耳静脉，20－30ml空气3.击头法：重物猛击，迅速致死。4.颈椎脱臼法：小白鼠5.破坏脑和脊髓：金属探针，蛙6.股动脉放血：麻醉后放血使大动物迅速死亡。二、取材的步骤选择动物选择取材部位选择切面方向应根据实验工作的目的和经济能力选择实验动物肝脏—猪肝卵巢—猫胃—狗运动终板—爬虫类动物肥大细胞—大、小白鼠的皮下组织间皮和内皮—蛙的肠系膜根据器官组织的结构特

7、点选择取材部位胰腺—胰尾部脊髓的运动神经元—颈膨大和腰膨大处肺—肺门胃—胃底部根据器官组织的结构特点选择取材时切面的方向肾脏—肾门处作纵切头皮—顺毛根的方向纵切大小肠的环行皱襞—纵切气管和食管—横切三、取材时应注意的问题：组织新鲜：取材动作快捷，迅速投入固定液注意环境温度的影响：冰上取材或者冷固定材料应小而薄：不超过1.5×1.5×0.5cm3固定液会造成组织收缩，注意保持组织原有形态取材手术器械锋利规范操作，防止组织损害注意取材环境和器械干净，防止组织污染固定和固定后处理一、固定的目的：固定剂使

8、细胞的成分凝固，防止组织细胞自溶和腐败，保持细胞生活时的状态。固定剂的酶染作用使细胞各成分易于被染料着色。使组织适度硬化，利于制作薄片。二、固定的方法：1.直接固定：最常用。2.蒸汽固定：1－2％锇酸或者甲醛挥发的蒸汽，多用于涂片固定。3.灌注固定：（必须进行后固定）局部灌注固定：肺、肾脏、眼球、肝脏全身灌注固定：神经系统三、固定的注意事项：固定剂的用量一般为组织块体积的15倍左右固定剂的配制现配现用固定的时间受较多因素的影响。一般过夜或者24小时可达到固定要求。四、常用固定剂单纯