标准病理组织制片和染色技术

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1、病理组织制片和染色技术张进华一、前言病理组织制片和染色技术是病理学的重要组成部分，病理的教学、科研、临床活检、尸解检验、诊断等都离不开制片染色技术工作。因此，组织的制片和染色技术是研究病理学的重要的方法和手段之一。近年来病理技术不断发展，如特殊染色、组织化学、免疫组织化学（免疫荧光组织化学、免疫酶组织化学）细胞培养、原位分子杂交、放射自显影、原位PCR技术等在广泛的应用和提高，大大促进了病理学科的发展，把病理学推进了一个新的领域，但这些新技术也都建立在病理组织制片或染色基础上，所以要认识制片和染色技术的重要性，不但要学习新技术，更要掌握这一传统的病理技术

2、，共同推向病理学科的发展。组织制片技术的应用，从1665年由Hook发现细胞开始已300多年历史，最早应用冰冻切片随后又发展了石蜡切片，后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡（聚乙二醇）、塑料、包埋组织而制作切片。从而观察不同的组织、细胞的形态结构，以及细胞内某些化学成份含量变化。各种组织制片成切片标本，须要经过一个比较繁多的过程，现将制作切片的主要程序和制片的种类，介绍：组织取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、各级酒精、水洗、常规染色、脱水、透明、树胶封固。石蜡制片程序冰冻制片程序组织取材、冰冻切片、干燥粘片、固定、染色、脱水、透明、树胶

3、封片。非切片（了解内容）1整体封藏法－低等动物自身薄片如：鱼鳞片、蛙胚。2涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹水等3、磨片法－主要用有钙盐坚硬材料，牙齿、介壳、坚骨－手工磨4分离法a、压片法－动终板的制备b、撕碎法c压碎法二、取材（实验病理、临床病理、尸解诊断）1、实验病理取材动物的杀死：动物杀死方法很多，根据动物大小、种别、观察目的而定。A：断头法：青蛙、小鼠等较小的动物B：空气栓塞法：兔猫（20－40ml）狗100mlC：麻醉法：乙醚、氯仿、4%巴比妥作V注射1ml/1kg，20%氨基甲酸乙酯（尿烷）作腹腔注射5ml/1kgD：击头法：大鼠E：放血法：眼

4、球放血（小鼠）股动脉放血，大动物：　牛、猪原则：要尽避免使动物长时间陷入痛苦和濒于死亡状态，以免疫组织成份，结构发生变化，引起病理假象。(1)　取材时所用的刀要锐利，动作仔细，不可来回切割，勿使组织受挤压。(2)　注意组织，器官的切面：肾脏——纵切脑——（表面和脑沟成直角）垂直切肝脾——横纵均可（3）保持组织清洁：血液，污物，粘液，食物用生理盐水洗净。（4）保持标本新鲜：动物死后立即固定。(5)切取组织大小：0.5×0.5×0.2cm1×1×0.3cm1.5×1.5×0.5cm2.临床活检取材：注意事项：（1）申请单位姓名与标本一致，防止混乱差错。（2）

5、检查标本是否符合要求—干涸坏变，固定液多少。（3）取材时描写：大小，形态，色泽，硬度等。（4）芝麻或针帽大小组织——染伊红？：镜纸包好（5）常见肿瘤取材方法：略。3.尸体解剖组织（脏器）取材：略。三．固定（fixalion）固定：新鲜组织浸泡在适宜的化学试剂内借助于化学试剂的作用，使组织或细胞内蛋白质凝聚，沉淀，成为溶性并保持组织细胞原有的形态结构：称为固定。所使用的化学试剂配成的溶液，称为固定液。1.固定的目的(1)迅速防止组织细胞死后自溶和腐败（组织失氧→释放溶酶体酶→溶解组织）(2)固定或沉淀细胞内或组织液中蛋白，脂肪，糖原，无机盐和色素，使其不被

6、溶解和消失。(3)使组织硬化，有一定弹性→抵抗以后的脱水，透明，使组织发生扭曲，变形。(4)某些传染性标本，能防止疫病的扩散。（如结核等）(5)保存细胞内固有的物质：如包含体，线粒体，溶酶体等。(6)可增强染色作用(7)有利于各种细胞折光率。(8)固定后能产生良好的反差。2、固定的注意事项：(1)必须及时固定：夏天4h冬天24h就自溶。(2)固定液的用量：标本体积10－15倍。(3)固定时间：根据组织不同的种类、性质大小、固定液的种类而定。(4)固定用的容器要足够大，一般标本缸，广口瓶4、固定液的分类、配制和特性（1）分类A：凝固性－酒类、丙酮、氯化汞等

7、非凝固性－甲醛、戌二醛等B：醛类－甲醛、戌二醛氧化剂类－重铬酸钾、高猛酸钾蛋白质变性－酒精、苦味酸C：单纯固定液-10%甲醛95%乙醇混合固定液-Boon’sConroy’s(2)常用固定液的配制及性质：A：10%甲醛-应用广泛(注：36-40%作为活检、尸解、一般形态学观察常用)优点：刺激性气味、对组织渗透力强、固定均匀、能保存脂类（神经、髓鞘、高尔基体、线粒体、糖类保存）价格便宜、配制简单、使用方便。缺点：固定久产生色素图附10%中性甲醛(ph7.3-7.6)浓甲醛100ml自来水900ml加碳酸钙至饱和ph7.3-7.6(组织化学、免疫组化、保存抗

8、原)10%中性缓冲甲醛(ph7.0)浓甲醛100ml蒸馏水900mlNaH2po