组织病理学制片技术课件.ppt

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1、组织病理学制片技术德江县人民医院病理科1病理技术的应用帮助临床查明死因(尸检);手术后病变标本，明确诊断(临床活检);为教学、科研提供资料;取材(Samplecollection)→固定(Fixation)→脱水(Dehydration)→透明(Transparentizing)→浸蜡(Paraffinsoaking)→包埋(Embedding)第一节组织处理1.人为因素2.标本大小3.取材时间4.包埋方向5.边缘标记一、取材(Samplescollection)6.小标本的处理方法7.特殊情况取材8.取材数量9

2、.清除多余成分10.重复取材11.核对取材12.剩余组织存放二、固定(Fixation)固定就是用物理或化学方法，阻止组织细胞离体或培养细胞脱离生存环境后发生形态学变化。(一)固定的目的1.迅速阻断组织细胞离体后的自溶性变化，防止腐败，尽量保持组织细胞生活状态下的形态结构。2.使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变成不溶性物质，并保持原有的空间位置。3.固定剂有硬化作用,增加组织的硬度,便于制片。4.组织中的各种物质经固定后产生对染料的亲和力，利于染色和观察。（二）常用的固定方法1.浸泡固定法2.灌注固定法3.

3、细胞涂片的固定方法4.微波固定法5.蒸气固定法（三）常用的固定液1.单纯固定液(1)甲醛(formaldehyde)(2)酒精(alcohol)(3)苦味酸(picricacid)(4)丙酮(acetone)(5)醋酸(aceticacid)2.混合固定液(1)Bouin液：用于结缔组织及脂肪染色；(2)Zenker液：常用于三色染色；(3)4%多聚甲醛-磷酸二氢钠-氢氧化钠液；（四）固定时的注意事项1.标本应新鲜并及时取材，快速放入固定液中。特殊标本应单独固定和存放。2.固定液的用量一般固定液用量为组织块体积的

4、10~20倍，贵重的固定液不少于3~5倍。3.防止组织变形柔软或较薄的组织先平铺在吸水纸上，再投入固定剂中；含气或脂肪多的组织易浮于液面，可在组织表面覆盖棉花以达到充分固定。4.固定液的穿透性一般固定液在24h内不能穿透厚度大于2~3mm的实体组织或5mm的多孔疏松组织，故取材组织块的厚度原则上不应超过3~4mm。5.固定时间固定的时间与固定液的种类、组织类型、块大小、温度等有关。一般1.5cm×1.5cm×0.2~0.3cm大小的组织块,固定时间为12~24h。6.固定温度大多数可在室温(25℃)固定，在低温(

5、如4℃)固定时，固定时间要相应延长。三、脱水(Dehydration)组织经固定和水洗后含大量水分，水与石蜡不能混溶。因此在浸蜡和包埋前，必须进行脱水。常见的脱水剂有乙醇、正丁醇、丙酮等。为防止水份丢失过快，造成组织变形，一般采用梯度脱水法。也就是使脱水剂的浓度逐渐升高，脱水过程尽量缓和，减少组织变形。四、透明(Transparentizing)常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、环己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。目前也有用环己酮作为透明剂，环己酮为无色无毒液体，可与苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶

6、解石蜡。而且脱水时组织不收缩变硬，用于快速石蜡切片效果较好。五、浸蜡(Paraffinwaxsoaking)用熔化的切片石蜡逐渐替换组织中二甲苯的过程。六、组织的包埋和包埋方法(Embedding)（一）常规石蜡包埋（二）脱落细胞标本的包埋（三）微小标本的包埋第二节组织切片法(Tissuesectioning)组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀机等。一、组织切片机和切片刀1.石蜡切片机2.火棉胶切片机3.恒冷箱切

7、片机4.震动切片机石蜡切片机震动切片机恒冷箱切片机切片刀切片刀是切片机的重要部件，常见的有两种：一种为可重复使用的钢刀，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等，根据切片刀的形态，有平凹型、深平凹型、平楔型、双凹型。另一种为一次性钢刀片，是一种薄型切片刀片，用于普通石蜡切片。使用时固定在特制的刀架上。石蜡切片机用一次性钢刀片二、组织切片(Tissuesectioning)石蜡切片仍是目前各种切片制作方法中最常用、最普遍的一种方法。(一)切片前的准备1.备齐常用器具,如玻片、毛笔和铅笔或刻字笔。2

8、.检查切片机的工作状态,将固件都拧紧，检查切片刀是否锋利,切片刀质量是保证切片的关键。如果使用一次性刀片,应根据切片情况及时调整刀刃位置。（二）切片制作过程1.蜡块在冰箱中预冷，然后固定在切片机上。将切片刀装在刀架上。调整蜡块与刀的位置，使蜡块切面与刀刃接近。2.切片机多为轮转式，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，标本过小时修块