免疫组织化学概述与制片ppt课件

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1、免疫组织化学Immunohistochemistry参考教材《免疫组织化学实验技术及应用》主编：倪灿荣等第一章绪论目录一、定义和意义二、发展简史三、免疫学概念四、基本类型与原理五、种类六、基本过程一、免疫组织化学的定义及意义1、定义免疫组织化学(Immunohistochemistry)，又称免疫细胞化学(Immunocytochemistry)。已知的标记抗体（或抗原）原位显示细胞或组织内的相应抗原（或抗体）的方法,进行定性、定量、定位检测。原理：抗原、抗体特异性结合标记化学反应酶或其他物质标记抗体抗原-抗体反应抗原-抗体复合

2、物呈色化学反应底物在酶作用下产生有色物质2、基本理论组织化学呈色反应颜色（原位）3、优点高特异性高敏感性方法步骤统一形态、机能与代谢相结合,可定性、定位与定量4、免疫组织化学的意义（1）肿瘤诊疗肿瘤组织起源诊断肿瘤分型诊断确定肿瘤的良恶性确定转移性恶性肿瘤的原发部位指导肿瘤的治疗、判断预后（2）病原微生物（肿瘤病因）的检查（3）免疫性疾病的诊断（4）科学研究3、抗原决定族（抗原表位）：特殊的化学活性基团区域（二）抗体:1、定义:机体受抗原刺激后，浆细胞产生的，与相应抗原特异性反应的球蛋白（免疫球蛋白：Ig）。2、基本结构:一“Y

3、”字型的四肽链重链(heavychain,H)：两条、完全相同轻链(lightchain,L)：两条、完全相同二硫键：连接四肽链。二端:氨基端（可变区，V区）羧基端（恒定区，C区）（1）可变区（variableregion,V）：Ig分子氨基端，Aa的组成和排列顺序有变异，决定了抗体结合的特异性。（2）恒定区（constantregion,C）：Ig分子的羧基端，Aa组成和排列在同一动物种属中同类抗体比较恒定。具有免疫原性同一种属动物对不同抗原产生的同类抗体:V区:不同，C区:相同，免疫原性:相同。抗体抗抗体（二抗：种属特异性抗

4、体）免疫四、基本类型与原理（一）直接法（一步法）原理：（二）间接法原理：（三）非标记抗体酶法1、酶桥法：以第二抗体作桥，任何抗体都未标记原理：一抗和三抗来源于同一种属动物的同类抗体2、PAP法（peroxidase–Antiperoxidase,过氧化物酶－抗过氧化物酶法）原理：预先制备PAP复合物一抗和PAP复合物中的抗体来源于同一种属动物的同类抗体（四）亲和素-生物素法亲和素-生物素－过氧化物酶法（AvidinBiotinComplex：ABC法）原理：预先制备ABC复合物五、分类:按标记物的不同免疫荧光组织化学免疫酶组织化

5、学亲和免疫组织化学免疫金-银标记技术免疫双重和多重组织化学杂交免疫组织化学六.基本过程(1)抗原的提取和纯化(2)免疫动物或细胞融合(3)抗体提取与效价检测(4)标记抗体(5)细胞与组织切片标本的制备(6)免疫细胞化学反应和细胞化学显色(7)观察和记录结果第二章组织学制片技术一、定义和意义二、方法三、基本程序四、免疫组织化学石蜡切片制作一、定义和意义（一）概念将机体的组织、器官做成能在显微镜下观察的标本的技术（二）意义1、是组织学、胚胎学、病理学等生命科学研究组织细胞的正常与病理形态结构的主要方法。2、是显示组织、细胞中某些化学

6、成分、基因的定位分布和含量变化的不可缺少的手段。二、制片方法（一）非切片法：1、定义：不经切片机切片手续制成标本的方法。2、类型：①整装片（胚胎）：鸡胚②铺片（柔软组织）③涂片（液体）④磨片（骨、牙）⑤印片（淋巴结）类型：非切片法、切片2、类型：根据所用支持剂（包埋剂）的不同，分为：①石蜡切片②冰冻切片③火棉胶切片法（二）切片法:1、定义：用切片机(microtome)切成微米厚的薄片，制出标本切片的方法三、基本程序切片法2、冰冻切片取材冷冻切片染色封片1、石蜡切片取材固定脱水透明浸蜡包埋切片染色封片（一）取材：从人或动物体内取

7、下所需组织材料的过程1、材料来源（1）人体材料：手术、活检、尸检（2）动物材料①来源广泛②大多数动物组织结构与人体相似③有的结构比人类更典型四、免疫组织化学石蜡切片制作（1）麻醉：①吸入麻醉：将浸有乙醚或氯仿的棉球连同动物一起放入密闭容器内麻醉。适用对象：小动物缺点：乙醚麻醉：肺部充血、呼吸道分泌物增多②注射麻醉：静脉、肌肉或腹腔内注射麻醉剂：3%戊巴比妥等适用对象：较大动物缺点：内脏淤血2、动物的致死方法（2）空气栓塞：向动物静脉内注入一定的空气适用对象：较大动物，如兔、犬缺点：血管、内脏淤血（3）断头：用剪刀剪去动物头部适用

8、对象：小动物，如青蛙、小鼠（4）其他方法：击头法、断髓法、股动脉放血法等3、致死原则：（1）选择合适的致死方法：利于取材和观察（2）快速致死，避免挣扎4、取材注意事项（1）根据实验目的选择动物的种类：肝脏—猪肝、胃—狗、卵巢—猫（2）组织材料要新鲜：在心跳未停