《石蜡制片方法》PPT课件

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1、固定液的种类和常用固定液的配方固定液的种类分为两大类：简单固定液和混合固定液。1.简单固定液又称单纯固定液就是用一种化学试剂作为固定液。种类有：乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞和锇酸等八种。2.混合固定液就是用几种化学药品，按一定的比例混合配制而成的，由于各种药品的优缺点互相弥补，因此可产生较好的效果。常用固定液的配方（1）福尔马林[Formalin，37—40％的甲醛(HCHO)]适合固定的浓度：10％福尔马林(3.7—4％甲醛)（2）卡诺氏液(Carnoy'sFluid)适用范围：适用于胚胎学、细胞学研究。配方：(1)纯酒精3份冰醋酸1份(2)纯酒精6份冰醋酸1份氯仿3

2、份卡诺氏液的处理方法和特点处理：固定时间为12—24小时，也可缩短。根尖可固定15分钟。花药固定1小时，子房可固定12—24小时。固定完毕可用95％或纯酒精洗涤，换二次，经二甲苯与纯酒精等量混合液过渡，二甲苯透明两次，就可进入石蜡中浸蜡。如果不立即制片时，可转入70%酒精中保存。特点：固定液穿透力既强又快，纯酒精固定细胞质，冰醋酸固定染色质，并能防止组织由酒精引起的高度收缩与硬化。（3）福尔马林——醋酸——酒精混合液(FAA)适用范围：适用于植物各器官解剖结构的观察，但不适于染色体观察研究。配方：50％或70％酒精90毫升冰醋酸5毫升福尔马林5毫升处理：1、一般柔软材料，可用50％酒精。2、

3、固定时间最短需18小时，也可无限期延长。3、冲洗时材料可直接换入50％或70％酒精中洗一、二次，木质材料在流水中冲洗48小时，并在酒精(50％)和甘油溶液(1：1)中浸2、3天，使它软化。（4）纳瓦兴氏液(Navaschin’sFluid)适用范围：植物组织及细胞学的研究配方：甲液：10％铬酸15毫升冰醋酸10毫升蒸馏水75毫升乙液：福尔马林40毫升蒸馏水60毫升在使用之前，才将甲、乙两液等量混合。材料经固定之后可在此液中长期保存。处理：固定时间为24-48小时，固定后可直接在蒸馏水中洗几次，再继续脱水。冲洗目的材料自固定液中取出后，须立即冲洗，使其中含有的固定液全部除去，—直到洗净为止，否

4、则防碍染色和保存。冲洗液的选择冲洗液应依固定液的性质而定，一般水溶性的固定剂用水来冲洗，酒精溶性的固定剂用相同浓度的酒精冲洗。冲洗的方法1、水冲洗法2、酒精洗涤法脱水脱水的目的目的：除去组织中的水分，使组织变硬。原因：水和石蜡是不溶的，经过脱水剂将水分脱净，透明剂透明后，才能进入包埋阶段。脱水不干净，影响制片效果，甚至完全失败。脱水剂及其脱水方法脱水剂最常用的脱水剂为酒精。此外还有丙酮、正丁醇和叔丁醇等。脱水方法1.配制下列各级浓度的酒精：15％，35％，50％，70％，85％，95％，100％。2.一般经水洗的材料，脱水可自35％开始，柔弱的材料自15％开始，若用酒精洗涤，则可直接移入50

5、％或70％酒精中继续脱水。3.在每级中停留的时间，依材料的大小、性质以及留在固定液中的时间长短和固定液的溶解性而定。一股的标准是：(1)如洋葱、蚕豆等根尖和小片叶子一样大小的材料，每级停留约30分钟到1小时。(2)由FAA固定的草本茎，每级停留2小时，木本茎停4小时，较大的木材每级应延长为8—12小时。(3)脱水至纯酒精时，需更换二次，每次30分钟到1小时；材料大者，可多换一次。由95％换100％酒精时，瓶子上的塞子也应更换干燥的，以免有水分渗入。(4)已制成的切片，在染色缸中脱水时，每级停留时间约为3—10分钟。(5)脱水时应按顺序进行，级度不宜相差太大，一般应按第1项所配各级浓度进行。透

6、明透明的目的主要目的：1、替代组织中的酒精或丙酮，使石蜡能很顺利的进入组织中。2、增强组织的折光系数。3、能和封藏剂混合进行封藏。透明剂的特性必须具有既能与脱水剂相溶又能与包埋剂相溶的特性。透明剂的种类常用的明透剂有二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和苯胺油等，二甲苯为最常用的透明剂。透明的方法为了避免组织收缩，在纯酒精或丙酮脱水以后，必须经过几个级度，逐渐置换，最后移入二甲苯中。酒精与二甲苯混合的比例列表如下：级别ⅠⅡⅢⅣ纯酒精2/31/21/30二甲苯1/31/22/31在透明时应注意的问题1.如材料内仍留有微量水分，二甲苯就进不去，因此石蜡也不能透入，切片后将在蜡片上出现空洞。2.切片内留

7、有微量水分，在封藏以后，就会发生乳白色的云雾状，在显微镜下观察时，可见许多密集水珠把组织掩盖，影响观察。3.二甲苯极易挥发，故在切片透明之后，从染色缸中取出封藏，手续要敏捷，不宜久置，否则待二甲苯挥发干净后，组织就变硬发白。4.二甲苯极易吸收空气中的水分，故在湿度大的天气，贮有二甲苯的染色缸的盖子周缘可涂少许凡士林，以防止水分的渗入。在封片时也不宜将口鼻过分靠近切片，以免水气侵入，出现白色云雾状。5.二甲苯必